目的:研究发现脑缺血后逐渐恢复再灌注血流量对大脑有保护作用,目前低灌注与正常灌注交替处理对脑缺血损伤的作用未见报道。本课题拟建立大鼠二血管夹闭联合低血压法脑缺血再灌注模型,观察脑缺血后低灌注与正常灌注交替处理(低灌注后处理)对大鼠脑缺血后神经行为学、海马CA1区神经元的凋亡、p63亚型的表达以及血浆S100β浓度的影响,探讨低灌注与正常灌注交替处理对大鼠脑缺血后有无神经保护作用,为临床上缺血性脑损伤的治疗提供新的思路。方法:雄性SD大鼠80只,随机等分为四组:假手术(Sham)组、脑缺血再灌注(I/R)组、低灌注后处理组1(HR1)、低灌注后处理组2(HR2)。神经行为学评分16-20分纳入实验。Sham组不行脑缺血处理;I/R组行脑缺血处理;HR1、HR2组脑缺血处理后行低灌注后处理。脑缺血模型:夹闭双侧颈总动脉(BCCA),同时从股动脉抽血,使MAP下降至30-35mmHg,维持20min后开放BCCA并回输血液、液体,将MAP回升至80-90mmHg,维持30min。低灌注后处理:HR1组再灌注开始时,继续夹闭BCCA,将MAP回升到80-90mmHg,维持10min后开放BCCA2min,反复三次。HR2组再灌注开始时,继续夹闭一侧CCA和对侧CCA血管直径的1/2,MAP回升到80-90mmHg,维持1Omin完全开放BCCA 2min,反复三次。各组大鼠分别于脑缺血后6h、1d、3d、5d行神经行为学评分后处死取脑,行HE和TUNEL染色分别计算海马CA1区神经元密度及神经元凋亡指数;免疫组化测海马CA1区p63亚型TAp63、ΔNp63的表达,并对两者表达行半定量分析;同时于脑缺血前、各时点处死前抽股动脉血检测血浆S100β浓度。结果:1.动物模型复制情况本实验中8只大鼠死亡:3只死于术中呼吸心跳骤停,另5只造模后未到取材时间点死亡,均予以补充。最后共80只大鼠进入实验统计。2.神经行为学80只大鼠造模前神经行为学评分正常。Sham组大鼠各时点神经行为学评分正常。I/R、HR1、HR2组在脑缺血后各时点大鼠神经行为学评分显著低于造模前(p<0.01),其中3d降低最多。HR1、HR2两组之间神经行为学评分无显著差异(p>0.05),但均高于I/R组(p<0.05)。3.神经元密度Sham组大鼠海马CA1区HE染色正常。I/R、HR1、HR2组与Sham组比较1d、3d、5d神经元密度显著降低(p<0.01),其中3d降低最多。HR1、HR2两组同时点神经元密度无差异(p>0.05),但两组均高于 I/R 组(p<0.05)。4.神经元凋亡Sham组大鼠海马CA1区在术后各时点可见少量凋亡细胞。I/R、HR1、HR2组与Sham组比较1d、3d、5d大鼠海马CA1区凋亡细胞指数显著升高(p<0.01),其中3d升高最多。HR1、HR2两组同时点凋亡细胞指数无差异(p>0.05),但两组均小于I/R组(p<0.05)。5.TAp63、ΔNp63蛋白的表达Sham组术后各时点海马CA1区可见少量的TAp63以及ΔNp63蛋白的表达,蛋白表达≤5%,记为阴性表达。I/R、HR1、HR2 组与 Sham 比较,1d、3d、5dTAp63、ΔNp63 蛋白的表达显著升高(p<0.01),其中TAp63 3d最高为(+++),而ΔNp63在5d最高:I/R组为(+),HR1、HR2组为(+++)。HR1、HR2两组同时点海马CA1TAp63以及ΔNp63蛋白的表达均无差异(p>0.05),但两组TAp63的表达较I/R组降低(p<0.05),而ΔNp63的表达较I/R组升高。6.血浆S100β水平Sham组各时点血浆S100β浓度正常。I/R、HR1、HR2组与Sham组比较6h、1d、3d、5d血浆S100β浓度显著升高(p<0.01),其中3d升高最多。HR1与HR2两组同时点血浆S100β浓度比较差异无统计学意义(p>0.05),但较I/R组降低(p<0.05)。7.相关分析大鼠海马CA1区TAp63与ΔNp63的表达呈正相关(R=0.54,p<0.01)。大鼠血浆 S100β 浓度与 TAp63 呈正相关(R=0.38,p<0.01),与ΔNp63无相关性。血浆S100β浓度与海马CA1区神经元凋亡呈正相关(R=0.835,p<0.01)。结论:1.脑低灌注与正常灌注交替处理(低灌注后处理)对大鼠脑缺血具有神经保护作用。其可能作用机制是降低TAp63、升高ΔNp63在海马CA1区的表达、抑制凋亡。2.TAp63脑缺血再灌注后表达呈先升高后降低的趋势:1d开始升高,3d达到高峰,5d降低。ΔNp63在脑缺血再灌注后逐渐升高。3.大鼠海马CA1区TAp63的表达与ΔNp63的表达、血浆S100β浓度均呈正相关。血浆S100β浓度与海马CA1区神经元凋亡指数呈正相关。