论文部分内容阅读
本文主要从以下几部分进行论述： 第一部分 探讨IL-34在大鼠角膜移植的作用机制 目的：探讨IL-34在大鼠角膜移植术后的表达情况以及在免疫排斥反应中的作用机制。 方法：以SD大鼠为供体、Wistar大鼠为受体建立角膜移植实验模型。Wistar大鼠60只，按照随机数字表法将Wistar大鼠随机分为3组，B组为自体角膜移植组，C、D组行同种异体角膜移植术。另取10只为正常对照组（A组）。术后B、C组术眼泰利必妥滴眼液处理，D组术眼典必殊滴眼液处理。参照Larkin等的排斥反应评分标准判断角膜植片的存活情况并做生存分析。其余大鼠于术后第14天取术眼角膜植片，行组织病理学、免疫组化及RT-PCR检测。 结果：生存分析结果提示，B组角膜不发生排斥反应，D组角膜平均存活时间(MST)为26±0.97d，远高于C组角膜平均存活时间10±1.55 d(P＜0.001)。HE染色显示，C组角膜组织各层有大量炎性细胞浸润以及新生血管形成，D组仅有少量炎性细胞、新生血管。免疫组化提示，IL-34蛋白在C组的表达量(0.0894±0.0056)明显高于A组(0.0377±0.0023)、B组(0.0684±0.0044)和D组（0.0445±0.0045）的表达量（F=145.21，P＜0.01），且主要集中在上皮层和基质层。qRT-PCR提示，IL-34及IL-1β、TNF-α、IL-17A的mRNA在C组角膜组织中表达水平明显高于A组、B组和D组（P＜0.05）。 结论：IL-34参与了大鼠角膜移植术后的排斥反应，而典必殊可能通过抑制IL-34的表达及相关的信号通路，延缓排斥反应的进展。 第二部分 基于高通量测序综合分析microRNA在角膜移植中的作用机制 目的：应用高通量测序技术和生物信息学技术综合分析大鼠角膜移植后microRNA的差异表达及调控网络，为探讨临床角膜移植排斥反应新的治疗靶点提供理论和实验依据。 方法：应用高通量测序技术筛选正常对照组（A组）、自体角膜移植（B组）和异体角膜移植组（C组）差异miRNA的表达。使用靶基因预测软件(targetScan、Miranda、miRDB、CLIP)预测miRNA靶基因，并选取共同预测的靶基因进行GO、KEGG、PPI、MetaCore分析等生物信息学分析，并用RT-PCR验证关键的差异miRNA。 结果：在B组和A组比较组有22个明显的上调，4个明显下调的miRNA;C组和B组比较组中有17显著上调miRNA和7个miRNA7显著降低(P＜0.01)。其中，miR-155-5p，miR-142-3p，miR-142-5p和miR-223-3p是同时出现在上述2个比较组。GO和KEGG分析表明，miRNAs的功能主要涉及代谢途径、细胞因子的分泌与肿瘤免疫。PPI和MetaCore分析显示，miR-155-5p在miRNA-mRNA基因的调控网络中的重要基因，MetaCore分析表明C/EBPβ、p53、SP1作为调控网络中的关键转录因子。 结论：miRNA参与了角膜移植排斥反应，miR-155-5p，miR-142-3p，miR-142-5p和miR-223-3p可能同时调控角膜损伤和角膜移植排斥反应，C/EBPβ、p53、SP1可能作为其中关键的蛋白分子。