【摘 要】
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该研究以通用的腺相关病毒质粒pSNAV-1为基础,构建成分别以CMV和hEF1α为启动子含hFⅨ基因或荧光素酶(LUC)报告基因的4种重组质粒,转染BHK-21细胞,经G418选择培养,分别得到包
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该研究以通用的腺相关病毒质粒pSNAV-1为基础,构建成分别以CMV和hEF1α为启动子含hFⅨ基因或荧光素酶(LUC)报告基因的4种重组质粒,转染BHK-21细胞,经G418选择培养,分别得到包装病毒用的载体细胞株.再用rAAV1和rAAV2各自的包装辅助病毒感染载体细胞株,包装并纯化后得到6种高纯度的重组AAV病毒.并制备了4株抗rAAV2的单克隆抗体.该研究表明:rAAV1转导细胞可能是通过多个受体所介导,HPSG不是AAV1的受体,rAAV1和rAAV2有不同细胞和组织亲嗜性.当rAAV1和rAAV2携带的外源基因表达量较低的情况下,丁酸钠刺激能增强基因表达,提高检测的灵敏度.rAAV1与rAAV2转导的MOI(v.g./cell)超过一定范围,其转导基因的表达量反而有所降低,存在过量抑制现象.rAAV2/hEF1a-hFⅨ转导体外培养HepG2细胞,有较高水平hFⅨ表达;rAAV1介导hFⅨ在肌肉中表达量明显高于rAAV2,为我们采用rAAV1肌肉途径及rAAV2肝脏给药途径基因治疗血友病B的进一研究打下了初步的基础.rAAV2/CMV-hFⅨ多点肌肉注射能有效治疗血友病B模型小鼠,为rAAV2/hFⅨ进入基因治疗血友病B临床试验奠定了坚实的基础.
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