长形肉豆蔻化学成分及炮制工艺研究

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目的:肉豆蔻(学名)为《中国药典》2005版收载的中药,现在市场上出售的肉豆蔻有两种,一种是圆形肉豆蔻,一种是长形肉豆蔻。在印度尼西亚市场上圆形的作为香料,而长形的却作为药用。国内正好相反,所以本研究旨在中医药理论的指导下,欲应用现代科学技术手段,首次对长形肉豆蔻(学名)进行全而深入的研究,制定炮制工艺,对其化学成分及药理作用与圆形肉豆蔻进行比较研究,并制定长形肉豆蔻的质量标准。材料与方法:1.材料:长形肉豆蔻药材购于安徽毫州,经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为肉豆蔻科植物长形肉豆蔻(Mystica argentea Warb.)的干燥成熟种仁。圆形肉豆蔻药材购于沈阳市药材公司,经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为肉豆蔻科植物肉豆蔻(Mystica fragrans Houtt.)的干燥成熟种仁。2.方法:(1)通过高效液相色谱法、薄层色谱法、气质联用色谱法和电感耦合等离子体质谱法对两种肉豆蔻的化学成分进行比较,并通过硅胶柱层析,凝胶柱层析,重结晶等多种手段,从长形肉豆蔻的挥发性和非挥发性成分中分离纯化得到单体化合物。(2)以甲基丁香酚、异甲基丁香酚和黄樟醚为指标,采用高效液相色谱法对两种肉豆蔻面煨、滑石粉煨、麸煨、泡后麸煨四种炮制工艺进行比较,并采用正交设计L9(34)优选长形肉豆蔻的最佳炮制工艺。(3)应用急性毒性实验方法,观察并用改良寇氏法计算小鼠的LD50值。通过对正常小鼠的肠推进方法和抑制新斯的明引起的小鼠小肠功能亢进的方法,比较两种肉豆蔻生品及其炮制品涩肠止泻的作用功效。(4)通过对长形肉豆蔻生品及麸煨长形肉豆蔻十批放大样品的水分、总灰分及酸不溶灰分的测定以及重金属限量检查、砷盐检查等,制定长形肉豆蔻生品及麸煨长形肉豆蔻的质量标准。结果:1.两种肉豆蔻的化学成分比较研究通过对两种肉豆蔻的挥发性成分和非挥发性成分进行初步比较,发现两者成分大致相同,但在含量上有显著性差异,特别是长形肉豆蔻中肉豆蔻醚含量较少,因此对长形肉豆蔻挥发性和非挥发性成分做进一步的研究,分离出12个化合物,分别为黄樟醚(Ⅰ),甲基丁香酚(Ⅱ),异甲基丁香酚(Ⅲ):(E)-3-(benzo[d][1,3】dioxol-5-yl)prop-2-en-1-ol(1),7-hydroxy-3.4′-methylene-flavan(2),1,4苯二甲酸甲酯(3),内消旋二氢愈创木酸(4),erythro-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-4-(3,4-methylenedioxyphenyl)-2,3-dimethy Ibutane(5),赤式-1-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-2-(4-丙烯基-2-甲氧基苯氧基)-丙烷-1-醇(6),(7S,7′R,8S,8′R)-7,7′-Di-(4-hydrox y-3-methoxyphenyl)-8,8′-dimethyltetro-hydrofuran(7),β-谷甾醇(8),胡萝卜苷(9),其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ:1、2、3、6、8、9是首次从长形肉豆蔻植物中分离得到。采用GC/MS和ICP/MS方法分析长形肉豆蔻和圆形肉豆蔻的挥发油和无机元素,在挥发油中鉴定出长形肉豆蔻生品32个化合物,其炮制品29个化合物,圆形肉豆蔻生品35个化合物,其炮制品36个化合物。两种肉豆蔻在炮制前后无机元素的含量情况:Mg、Ca、Fe、Na的含量在炮制后有所升高:K有所降低。而且圆形肉豆蔻中的必需元素含量比长形肉豆蔻中的含量多。2.两种肉豆蔻的炮制工艺比较研究两种肉豆蔻经炮制后,挥发油含量都有不同程度的降低,止泻的有效成分甲基丁香酚和异甲基丁香酚含量也都有所增加,但圆形肉豆蔻炮制品增加的较为显著。两种肉豆蔻的毒性成分黄樟醚经炮制后都略微有所下降。优选出长形肉豆蔻的最佳炮制工艺为:长形肉豆蔻用水浸泡6小时后,麸煨温度160~170℃,麸煨时间25min,每100kg长形肉豆蔻,用40kg麦麸。3.两种肉豆蔻的药效学初步比较研究长形肉豆蔻生品的LD50=17.5g/kg,麸煨长形肉豆蔻的LD50=23.5g/kg两种肉豆蔻经炮制后均能明显的抑制小鼠小肠推动运动,并能抑制新斯的明引起的小肠推进功能亢进。且圆形肉豆蔻炮制品的止泻作用更为显著。4.长形肉豆蔻生品及其麸煨品的质量标准。初步制定长形肉豆蔻生品及其麸煨品的质量标准。暂定:长形肉豆蔻生品中:甲基丁香酚不少于0.035%;异甲基丁香酚不少于0.007%;黄樟醚不多于1.004%。麸煨长形肉豆蔻中:甲基丁香酚不少于0.056%:异甲基丁香酚不少于0.0089%;黄樟醚不可多于0.85%。结论:根据长形肉豆蔻与圆形肉豆蔻的化学成分、炮制工艺、药理作用、质量标准等全面的比较研究,初步认为长形肉豆蔻可以作为肉豆蔻的一种使用。
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