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背景CRC发病过程较长,个体化差异大,已成为研究肿瘤病因与恶性肿瘤发病机理的理想模型。KLF6是Kruppel样因子家族具有锌指结构的核转录调控基因,广义上认为其具有抑癌作用。KLF6形成的可变剪接体SV2在CRC中的作用尚不明确,因此了解KLF6-SV2发挥的功能对揭开CRC的发病机理具有重要理论价值。目的本课题研究的目的是检测CRC癌组织、癌旁组织以及人CRC细胞株中KLF6基因SV2剪接体的表达情况,分析KLF6-SV2与CRC之间的相关关系。构建过表达KLF6-SV2剪接体的稳定细胞系,在对处理前后的细胞进行表达效果鉴定后,观察KLF6-SV2对CRC细胞生物学特性的影响并探究其具体作用机制,提供CRC发生发展的新线索。方法1.应用实时荧光定量反转录PCR法对收集于本院2012年10月-2013年12月期间的60对CRC肿瘤组织和对应癌旁组织中KLF6-SV2 m RNA的表达进行检测,并检测五种CRC细胞株中该基因的表达含量,观察KLF6-SV2剪接体在CRC中的表达情况。2.构建稳定过表达KLF6-SV2剪接体的慢病毒载体,选择相对表达量较低的两株细胞SW480和SW620,稳转入细胞株,构建过表达KLF6-SV2剪接体的细胞模型。3.细胞增殖、凋亡、周期的检测分别应用MTT比色法、Annexin V-APC流式细胞法、DNA倍体流式检测法,分析KLF6-SV2剪接体在CRC细胞中的生物功能。4.应用实时荧光定量反转录PCR和Western blot检测转染后各组细胞p53通路相关信号分子p53、p21、Bax的表达,探讨KLF6-SV2发挥作用的具体机制。结果1.在CRC肿瘤组织中KLF6-SV2 m RNA的相对表达量是(0.783±0.409),低于相应癌旁组织(1.086±0.449)(P=0.002)。五种CRC细胞株中,SV2在SW480和SW620中表达低于HCT116、Lo Vo和HT29(P<0.05)。2.定量PCR结果显示,空白对照与阴性对照组比较表达无差异(P>0.05);KLF6-SV2在SW480和SW620过表达组表达水平显著高于两对照组(P<0.01),表达增高分别为226和266倍。表明过表达KLF6-SV2的细胞株构建成功。3.转染后,SV2高表达。与阴性对照组比较,SW480和SW620过表达组细胞增殖能力在培养第3~5天显著降低。流式检测凋亡比率明显增大,细胞周期明显阻滞(P<0.05)。4.SW480和SW620过表达组p21、Bax的m RNA相对表达量与蛋白水平显著高于阴性对照(P<0.05),KLF6-SV2与这两种基因表达呈正相关;p53的表达无差异(P>0.05)。结论KLF6-SV2在CRC中表达降低。上调KLF6-SV2的表达可有效抑制CRC细胞增殖,阻碍细胞由G1期进入S期,提高CRC细胞的凋亡率。KLF6-SV2在CRC细胞中与p21、Bax呈正相关,且与p53表达是否上调无关。