本研究成功构建了重组人Bikunin(rhBikunin)表达载体pPICZαC-bik,利用巴斯德毕赤酵母稳定分泌表达了具有正确N-端序列的rhBikunin。rhBikunin具有与天然Bikunin相同的胰蛋白酶、纤溶酶等丝氨酸蛋白水解酶抑制活性,比活性为5600 IU/mg,并具有与天然Bikunin相同的热稳定性和酸碱稳定性。糖基化分析实验证实,rhBikunin不含硫酸软骨素糖链。利用80 L发酵罐进行了rhBikunin中试规模发酵条件的优化,产量达55 mg/L,并建立了一种适于大规模纯化rhBikunin的新方法,收率为66%,纯度达95%。体内、外分析实验表明,rhBikunin能有效抑制人高转移卵巢癌HO8910 PM细胞的体外浸润和转移,以及小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤在体内的自发肺转移,且具有与天然Bikunin相同的作用效果。rhBikunin抑制肿瘤浸润和转移的作用,与其抑制uPA系统从而抑制肿瘤细胞外基质的降解有关。本实验的创新之处在于:1)利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统建立了制备高纯度rhBikunin的新方法;2)证实rhBikunin具有与天然Bikunin相同的生物学作用。