【摘 要】
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目的:获取重组人IFN-λ1( rhIFN-λ1)的原核表达产物并测定其效价,研究rhIFN-λ1对兔角膜基质细胞的抗单纯疱疹病毒(Herpes Simplex virus ,HSV)作用。方法:用本实验室构建的
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目的:获取重组人IFN-λ1( rhIFN-λ1)的原核表达产物并测定其效价,研究rhIFN-λ1对兔角膜基质细胞的抗单纯疱疹病毒(Herpes Simplex virus ,HSV)作用。方法:用本实验室构建的含基因重组表达载体pGEX-4T-λ1的大肠杆菌BL21,经ITPG诱导表达和包涵体提取纯化后获取rhIFN-λ1蛋白,采用微量滴定法测定其效价。采用组织块培养法培养兔眼角膜基质细胞,用微量细胞病变法比较rhIFN-λ1、IFN-α标准品对兔眼角膜基质细胞的抗单纯疱疹病毒作用。结果:诱导含基因重组表达载体PGEX-4T-λ1的大肠杆菌BL21后,采用12%SDS-PAGE蛋白电泳显示出一条相对分子量约为33kDa的蛋白条带;采用微量滴定法测定其效价,用IFN-α标准品校正其效价为62 .5 IU/ml。125/2、125/4、125/8 IU/ml的IFN-α标准品、rhIFN-λ1均分别可抗32、16、8 TCID50HSV-I的感染。125/2、125/4、125/8 IU/ml的IFN-α标准品分别可抗16、8、4TCID50HSV-II的感染;125/2、125/4、125/8 IU/ml的rhIFN-λ1分别可对抗8、4、2TCID50HSV-II的感染。结论:含基因重组表达载体pGEX-4T-λ1的大肠杆菌BL21,经ITPG诱导表达和包涵体提取纯化后可获得rhIFN-λ1,它对兔眼角膜基质细胞有一定的抗单纯疱疹病毒作用。rhIFN-λ1抗HSV-I的作用与IFN-α相近;rhIFN-λ1抗HSV-II的作用比IFN-α约弱一倍。
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