致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a因子单克隆抗体的研制及其初步应用

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以表达F18ac菌毛参考菌株2134(O157:H19)为材料,摸索出了F18ac菌毛表达的最佳条件,采用热洗脱法使菌毛脱落,经硫酸铵沉淀、透析后离心收集沉淀,经SDS-PAGE鉴定,获得了较纯的F18ac菌毛,其主要亚单位分子量约为17kD。将粗提的F18ac菌毛免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,用直接玻板疑集试验筛选出1株杂交瘤细胞株1984,它能稳定分泌针对F18ac菌毛和F18ab菌毛共同的抗原表位a因子的单克隆抗体,细胞培养上清对F18ac菌毛参考菌株2134和F18ab菌毛的参考菌株107/86的直接凝集价均可达1:8,腹水单抗直接凝集效价可达1:1024。特异性检测结果显示,该单抗与表达了F18ac菌毛参考菌株2134和F18ab菌毛的参考菌株107/86都能发生凝集反应,而与猪源产F4、F5、F6和F41粘附素大肠杆菌菌株、鸡源产Ⅰ型菌毛大肠杆菌菌株及沙门氏菌不发生凝集反应。免疫印迹试验表明,腹水单抗可同时特异识别F18ac菌毛17kD和F18ab菌毛15kD左右的主要亚单位多肽。上述试验证实我们研制的单抗所针对的抗原表位是F18菌毛的a因子。 应用我们所研制的单抗对215株断奶仔猪腹泻大肠杆菌分离株进行了检测,结果显示:上述分离株的TSB培养物中F18菌毛的检出率为13.4%,TSA培养物的检出率为8.4%。F18菌毛阳性分离株的O血清型除了常见血清型O139、O141外,还有非常见血清型O107和O131。分离株TSB培养物的检出率明显高于TSA培养物的检出率,表明猪源大肠杆菌分离株F18菌毛在TSB培养基中培养比在TSA培养基上培养更容易表达,TSB培养基是致断奶仔猪腹泻和水肿病大肠杆菌F18菌毛抗原检测、流行病学调查的首选培养基。
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