中性蛋白酶是一类广泛应用于医药及食品工业的重要酶类。目前我国中性蛋白酶的生产及制备工艺还处在一个较低的水平。国内市场基本为外国酶制剂公司所垄断,因此进行该酶的相关生产技术研究就显得尤为重要。本论文的研究正是结合实际生产需要,以实验室的一株枯草芽孢杆菌为出发菌株,通过(60)~Coγ-DES,物理化学复合诱变提高了菌株的产酶能力,后又对其发酵工艺条件进行优化,讨论了液体酶提取的制备工艺,并对液体酶酶学性质及保存工艺进行了研究,建立了能够应用于中性蛋白酶生产的中试工艺,现将研究成果分阶段总结如下:1.高产菌株的复合诱变由本院微生物实验室提供的枯草芽孢杆菌作为出发菌株,通过(60)~Coγ-DES((60)~Coγ-硫酸二乙酯)进行物理化学复合诱变,诱变后用酪蛋白水解圈法作为初筛,并经过摇瓶复筛后,得到一株活力较出发菌株产酶活力增大44.5%的突变株,选取其后期发酵条件研究的菌株;2.突变株Co9-5的培养基筛选及发酵工艺条件研究通过菌体生长所需最适碳源,氮源,pH及生长因子的分析,利用正交试验对其生长发酵所需培养基进行了筛选研究,并讨论了溶氧(装液量和转速),接种量,发酵温度等发酵工艺参数对菌体生长及产酶的影响。实验最终获得最佳培养基方案为:玉米粉3.5%,蔗糖1.5%,豆粕粉2.5%,麸皮5.5%,0.3%Na2HPO4,0.03%KH2PO4,pH7.0,经过优化,产酶能力可达到2135.43U,初步的发酵工艺条件为:接种量1%,发酵温度为(30±2)℃,转速200r/min菌体生长可以获得较好的酶活。3.液体酶的提取与分离以酶制剂生产厂家提供的发酵液为材料,通过不同助滤剂、絮凝剂及不同过滤方式等对酶液收率、澄清度及滤速的筛选考察,利用实验室布氏漏斗模拟板框过滤,最终获得液体酶制备的工艺为:发酵原液向其加入20%的壳聚糖作为絮凝剂并静置10-30min后,用8%白硅藻土作为助滤剂,可获得滤速达0.8h/L,澄清透亮,收率为94%的液体蛋白酶。4.酶学性质的研究对中性蛋白酶酶作用的最适pH,最适温度,金属离子,有机溶剂对酶的影响进行了讨论,结果表明该酶最适pH为7.5,最适反应温度为40℃,钙离子,锰离子对其有不同程度的激活作用,而铁离子,亚铁离子,乙醇,甲醇等对其有抑制作用。5.液体酶保存的研究通过不同底物、盐类、金属离子、多元醇类、糖类等不同的热稳定剂的保护作用的筛选,利用正交试验进行了最佳方案的优化,得到最佳保护剂配比为甘油为25%,大豆蛋白为4%,葡萄糖8%,氯化钙浓度为80mmol/L,通过保护剂长效实验,本实验所得液体酶保护剂在25°C可使液体酶稳定保存三个月。