野油菜黄单胞菌腺苷激酶基因的鉴定及功能分析

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腺苷激酶属于核糖激酶蛋白家族,是体内嘌呤补救合成途径的一种关键酶,参与腺苷合成代谢第一步反应催化腺苷生成腺苷一磷酸(AMP),对调节细胞内外的腺苷水平起着重要的作用。该酶在真核生物中广泛存在,而在原核生物中目前仅有两例革兰氏阳性细菌报道存在腺苷激酶。生物信息学分析表明,野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,以下简称Xcc)基因组中有一个编号为XC_0690的ORF可能编码一个腺苷激酶。   为了研究XC_0690基因编码产物的功能,本工作将XC_0690克隆到表达载体,并在大肠杆菌中过量表达获得融合蛋白XC0690-His6,采用放射性同位素标记薄层层析和高效液相色谱分析手段研究融合蛋白的生化功能,结果发现该融合蛋白能够将腺苷磷酸化生成AMP。   采用pk18mob介导的方法构建XC_0690的整合突变体0690pk,并对该突变体的表型进行分析,发现突变体的胞外多糖,致病力,游动性比野生型明显降低,将一段包含完整XC_0690的PCR扩增得到的DNA片段克隆到载体pLAF6,获得的重组质粒能恢复突变体的表型至野生型水平。
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