【摘 要】
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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)中的Cyt2Ba7蛋白是一种杀蚊毒蛋白,它在Bt中表达量不高并且不形成晶体,因而难
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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)中的Cyt2Ba7蛋白是一种杀蚊毒蛋白,它在Bt中表达量不高并且不形成晶体,因而难于纯化并进行生物活性的研究.该研究将cyt2Ba7基因克隆到表达载体pQE30,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)M15进行诱导表达和纯化.纯化的Cyt2Ba7蛋白对于Sf9细胞具有溶细胞活性,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)三龄幼虫的半致死浓度(LC<,50>)为1.95μg/ml.此外,为了研究Cyt2Ba7蛋白C末端15个氨基酸的功能,我们将缺失这段氨基酸编码序列的cyt2Ba7基因在E.coli中进行表达、纯化和生物活性测定.结果显示缺失了C末端序列的Cyt2Ba7蛋白在溶细胞活性和杀蚊毒力等方面与全长的Cyt2Ba7蛋白相类似,但它的表达对E.coli宿主具有致死效应.由此可见该蛋白C末端序列可以保护宿主不受Cyt2蛋白毒性的影响,这可能是导致Cyt1与Cyta蛋白性质差异的一个重要原因.为了提高Cyt2Ba7蛋白在Bt中的表达量,我们将cyt2Ba7基因与分子伴侣p20基因串联,构建了表达质粒pHP20C并经电激转化Bt无晶体菌株4Q7,结果显示Cyt2Ba7蛋白的表达量提高了1.6倍,而且形成了具有不规则形状的蛋白晶体.免疫与配体印迹实验证明,P20与Cyt2Ba7蛋白之间存在着相互结合的作用.这是首次发现P20具有提高Cyt2类蛋白表达量并帮助形成晶体的作用,为进一步研究Bt中分子伴侣基因与ICPs基因的相互作用提供了重要参考.
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