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研究背景经络学说千百年来一直指导着中医学的临床实践,经络的客观存在与生物学内涵的研究是中医科研需解决的重要问题。上世纪中叶以来,国内外学者运用现代科学技术观察到了经络的一系列生物物理特性,为经络的客观存在提供了证据。经络是难以用肉眼直接观察到的,因此经络的可视化研究是现代经络科学研究的重要内容之一。但是目前缺乏安全便捷可从体表直接观察的可视化技术,寻找新的可视化技术是亟需解决的问题。只有真真正正的看到经络在哪里,才能更好地对经络的物质基础与效应机制开展研究。张维波教授的“经络间质通道”学说提示,经络是存在于间质中的组织液通道,且该通道具有低流阻的性质,并进行了一系列研究验证了该学说。张教授运用了经络运行组织液这一特性,通过注射与水亲和的荧光示踪剂在大鼠任脉组织液通道上,经过剥离皮肤后可以观察到循经迁移轨迹。但是由于大鼠四肢较小,难以观察四肢部的循经组织液通道分布,且还需剥离皮肤观察,不够方便简捷,还需要寻找合适的动物模型以及摸索更为简捷的实验技术条件来对循经组织液通道进行可视化。因此,本实验使用小型猪作为实验动物,通过向四肢部注射荧光素钠溶液,从体表直接观察荧光循经迁移轨迹,创建一种新的循经组织液通道可视化技术,对循经组织液通道的横切面特征进行深入研究,探寻运动对迁移轨迹的影响,来推动经络生物学内涵的研究。目的和意义本研究在“经络间质通道”学说研究的基础上,探索用荧光照相法进行小型猪四肢循经组织液通道的可视化显示,建立新的从体表可视化观察的技术,观察体表荧光轨迹的迁移特征及其与古典经脉循行路线的吻合度,为“经络间质通道”的研究提供新的影像学实验证据;分析荧光迁移轨迹与浅表静脉的相关性,探讨循经组织液通道的物质基础;观察荧光迁移轨迹横切面的分布特征,分析循经组织液通道的三维特征与空间结构,全方位立体了解循经组织液通道的分布;从间质通道角度探讨清醒和运动对组织液流动的影响,探讨组织液运行动力学的可能机制。研究方法实验一:小型猪循经低电阻线测定及荧光素钠注射参数的筛选用WQ6F30经络定位仪测量小型猪四肢部低电阻点（low impedance point,LIP）及其构成的十二条循经低电阻线（Low impedance line along meridian,LILM）,在LILM于腕踝部的LIP注射荧光素钠（Sodium Fluorescein,SF）溶液,比较不同注射剂量、试剂浓度、注射深度下的SF迁移特征,筛选SF溶液的注射参数。实验二:小型猪四肢荧光素钠循经迁移特征的观察在5只小型猪四肢腕踝部LIP或旁开高电阻点（High impedance point,HIP）注射SF溶液,用荧光照相法采集注射不同时间段SF迁移的图像,分析SF的分布特征,比较SF迁移轨迹与古典经脉循行线的吻合度;用投影式血管成像仪V800P体表投影浅表静脉,比较SF迁移轨迹与浅表静脉的位置关系;测量统计SF迁移轨迹的长度、宽度和长宽比,总结归纳SF循经迁移的规律。3只小型猪注射SF溶液后,运用干冰冷冻小型猪四肢,对SF迁移轨迹循行区域进行横向切片,用荧光照相法采集横切片的图像,观察SF迁移轨迹在横切面的分布特征,分析SF迁移轨迹的三维特征与空间结构。实验三:运动对小型猪四肢荧光素钠迁移的影响4只小型猪分别在清醒不运动（清醒组）、清醒运动（运动组）和麻醉（麻醉组）三种状态下注射SF溶液,清醒组注射后将小型猪放置于特制的猪笼中,运动组注射后将小型猪放置于动物跑步机中运动,麻醉组注射后将小型猪放置于试验台,用荧光照相法采集注射后60min时体表SF迁移轨迹图像,对三者的荧光照片以及心率进行比较,分析清醒不运动和清醒运动对组织液流动的影响。研究结果实验一:小型猪四肢部测得12条LILM,位置与人体十二经脉位置相似;以注射剂量0.4ml、SF浓度5%、注射深度3～4mm作为四肢部LIP注射SF溶液的参数时,体表迁移轨迹荧光强度最强,迁移长度更长,适宜观察。实验二:在小型猪四肢12条LILM注射SF溶液后,沿四肢LILM共出现可重复的7条体表循经迁移轨迹,其中前肢外侧3条,前肢内侧3条,后肢内侧1条。7条（共46例）SF迁移轨迹总平均迁移长度为5.13±2.12cm,平均宽度为0.99±0.5cm,平均长宽比为7.39±6.78;HIP组（11例）注射后进出现接近圆形的局部扩散,平均长度为2.5±0.62cm,平均宽度为2.08±0.43cm,平均长宽比为1.21±0.21。与HIP组比较,四肢LIP组总体SF体表迁移长度极显著延长（P<0.001）;四肢LIP组总体SF体表迁移宽度极显著小于HIP组（P<0.001）;四肢LIP组总体SF体表迁移的长宽比均极显著大于HIP组（P<0.001）;7条SF体表迁移轨迹与LILM的总吻合度为81.4%,迁移轨迹规律与古典经脉循行线基本吻合;体表SF迁移轨迹均与浅表静脉体表投影位置交叉而不重合。SF迁移轨迹是以倒三角形状呈现在横切面上,荧光轨迹在体表处较宽,往深部而渐渐变窄,上可达皮肤表面,下可至骨面,荧光轨迹在深层迁移近似长条形,荧光轨迹中可以看见明显的肌肉边界,荧光染料的范围在两个肌肉边界之间,并且荧光轨迹可向肌肉内扩散一定距离。深层的SF迁移轨迹远比体表处所能观察到的要长,宽度也比体表轨迹更宽一些。实验三:清醒组SF迁移轨迹的平均长度为5.38±0.平均长度为2.99±0.61cm,迹的平均长度为5.58±0.94cm,麻醉组SF迁移轨迹的66cm,运动组SF迁移轨与麻醉组比较,清醒组与运动组SF迁移的轨迹长度均极显著延长（P<0.001）。清醒组与运动组SF迁移轨迹的长度无显著性差异。清醒组平均心率为84 ±12.28bpm,运动组心率为118.5±9.3bpm,麻醉组平均心率71±7.33bpm。清醒组与麻醉组心率均极显著慢于运动组（P<0.001）,麻醉组心率显著慢于清醒组（P<0.05）。结论1.本研究成功建立了小型猪四肢低电阻点注射SF溶液可视化在体显示循经组织液通道的方法。2.可从体表观察到与循经低电阻线基本吻合的SF迁移轨迹,其在肢体深部的迁移长度要大于在体表所观察到的长度。组织液在间质通道中存在定向流动而非依浓度梯度的局部扩散。间质通道通常位于肌肉间隙之中,与浅表静脉交叉而不重合,不属于血管外周隙通道。以上观察提示荧光素钠迁移轨迹存在的通道可能是一种未知的间质通道,其可能与经络有关。3.清醒不运动和清醒运动运动均可以促进组织液的流动,但运动对流动的加强作用不明显。