【摘 要】
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采用RAPD技术对采自广州香蕉种质圃和海南大田的33个香蕉品种(系)的分子系统、遗传多样性和种质鉴定进行了研究,建立了香蕉RAPD分析技术体系:以CTAB法提取幼叶基因组DNA,按以
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采用RAPD技术对采自广州香蕉种质圃和海南大田的33个香蕉品种(系)的分子系统、遗传多样性和种质鉴定进行了研究,建立了香蕉RAPD分析技术体系:以CTAB法提取幼叶基因组DNA,按以下反应系统进行PCR反应:25ul反应体系中含1×buffer,0.2mMdNTPs,0.32pM primer,1U Tag DNA polymerase,20ng template DNA,反应程序为94<0>C 5min后,94<0>C 1 min,37<0>C 1 min,72<0>C 2min,45个循环,然后72<0>C,延伸10min,4<0>C保存.从249个随机引物中筛选到18个在7个品种模板都能得到较清晰扩增带,以它们扩增结困按照UPGMA法建立了香蕉的分子系统和亲缘关系树状图,其结果和基于表型、细胞学和同功酶研究结果比校相似,但同是巴西香蕉,采于广州和海南的却出较大差异;采自于广州和的红蕉也相距甚远.结合判别分析可对香蕉种质进行鉴定分析,"生5号"应属香(牙)蕉类、AAA群品系.遗传多样性分析结果表明,香蕉种内遗传多样性水平相对较高,RAPD多态性百分率达95.31%,遗传距离平均数MD为0.3412.采用He-基因枪和农杆菌(对单叶植物敏感)共转化法,以茎端分生组织,茎微盘和球形芽作受体材料用pTBB、pTBK和pTBBU分别转化巴西香蕉、生5号和金香蕉,最后筛选获得15株转化植株,PCR、Southern和血清学检测结果表明,其中三株为成功转基因植株;并建立了一简捷的香蕉基因转化体系:以茎微盘、茎端分生组织为转化受体材料,预培养2天;先用基因枪轰击,培养2天后再用经0.01mMAS+mMPro活化处珠农杆菌侵染,共培养2天后,转入各级抗生素筛选培基行政选鉴定成功转化植株.
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