尖峰岭国家森林公园被子植物生斑痣盘菌科分类学和基于ITS rDNA序列分子系统学研究

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本论文所研究的内容分为两个部分。对尖峰岭国家森林公园的被子植物生斑痣盘菌进行分类学研究是本文的第一部分内容。通过采取初步的检查、编号、归类等措施整理采自尖峰岭国家森林公园的真菌材料,并比对我们已有的标本,分类结果显示生长在被子植物上的斑痣盘菌科共有5个属13个种,亦即隶属于皮下盘菌属Hypoderma的悬钩子皮下盘菌H.rubi;齿裂菌属Coccomyces的尖丝齿裂菌C.mucronatus、尖齿裂菌C.dentatus、三角形齿裂菌C.delta、隐齿裂菌C.occultus;散斑壳属Lophodermium的贝壳杉散斑壳L.agathidis、茶生散斑壳L.camelliicola、针叶树散斑壳L.conigenum、异枝散斑壳L.heterocladum、八角生散斑壳L.illiciicola、松针散斑壳L.pinastri;玛莎盘菌属Marthamyces的中国玛莎盘菌M.chinensis;以及特里尔盘菌属Terriera的小特里尔盘菌T.minor。在这些分类群中,中国玛莎盘菌Marthamyces chinensis sp.nov.和异枝散斑壳L.heterocladum sp.nov.为新种;玛莎盘菌属Marthamyces为中国新记录属。利用显微镜对其进行外部的观察并通过冰冻切片对其内部进行显微检查,从而研究这二个新种的外部形态学特征及内部结构特征,并同时作了详细的有关新种的英文、中文描述,且附有包括子囊果生境、外表、子囊、子囊孢子以及侧丝结构等在内的点线合成图。与此同时对这些种的生态生境、地理分布等情况作了相关的调查、研究。表型性状分类分析为本文打下了坚实的基础,但是生物信息学和分子生物学相结合的方法对于本次研究来说也是不可或缺的一部分。对来自于海南尖峰岭国家森林公园的斑痣盘菌科的多个菌株的ITS rDNA序列进行PCR扩增,同时进行了相关序列的测定——这是本文第二部分的研究内容。而且最终有6个目标序列被我们所获得,并结合历任前辈所研究的来自其他地区的37个自测序列及来自GenBank的3个网上所下载的序列构建系统发育树。PAUP最大简约法是构建系统发育树的有效方法,本论文所采用的方法也是此法,它能够有效探讨研究本科种内、种间或属间的亲缘关系。另外,探讨该科属间、种间及种内的亲缘关系是在ITS rDNA单独序列构建系统发育树的基础之上,利用DNA条形码技术来实现的。CTAB法是提取本供试菌株DNA的方法,PCR扩增之后再进行测序,我们将所得到的序列与GenBank上的序列进行比对,与此同时选取适合的序列,外群则选取柔膜菌目的Leotia lubrica,之后进行了系统发育树的构建操作,对树进行分析研究需同时结合形态学的特征来分析,从而确定物种分类的地位。研究结果明确的显示出,通常在系统树里优先聚在一起的是斑痣盘菌科中的相同属、相同种,可是一些分隶在两个不同属、种而其表型性状却相似的斑痣盘菌,也是有可能会聚在一起的。菌物的研究、鉴定必须要将多种生物技术结合在一起来研究,仅仅是依靠单一的方法研究是不完善的也是不科学的——这也是我们本次研究所得出的结论之一,也就是说要想准确地进行菌物分类并确定其系统发育关系就必须以形态学分类为基础,综合其培养性状、个体发育、多基因综合分析来研究。作为菌体分类研究的补充手段之一的分子生物学技术,国内外专家、学者对本法是越来越受到关注及重视的,因为它有快速,准确等不可替代的特点。除此之外,为使我们的研究结果趋向进一步的准确,真菌DNA条形码技术的进一步完善及其数据库建立与优化步伐的加快也是迫在眉睫的。虽然在真菌分类中,分子生物学的方法有着非常重要的地位,但是真菌的遗传变异多样性也是客观存在的,所以真菌分类的最主要依据与方法非传统的形态学分类莫属。
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