目的 体外分离培养兔关节滑膜细胞，自行设计并构建编码细胞转化生长因子β1(transforming growth factor β1，TGF β1)的重组真核表达载体peDNA3.1-TGF β1质粒，用脂质体法将该质粒转染兔关节滑膜细胞(articular synoviocytes)，观察转染后滑膜组织来源的干细胞体外通过自分泌、诱导作用向软骨细胞方向分化的可行性，为基因加强组织工程学修复软骨损伤提供体外实验依据。 方法 1、取3月龄健康新西兰大白兔，雌雄不限，耳缘静脉注射空气处死，在严格消毒的条件下，迅速开腹切取小块肝脏组织，置入冻存管，立即投入液氮中冷冻；同时打开膝关节，用眼科镊撕取关节腔内面的滑膜组织，将术中取到的滑膜组织迅速带入无菌室，应用组织块培养法和酶消化法行滑膜细胞体外培养扩增，贴壁筛选、单一胶原酶消化和多次传代法相结合行纯化培养。 2、取出液氮中冷冻的肝脏组织，研磨成粉末，Trizol法提取总RNA，分析TGF β1mRNA序列，设计引物，用cDNA合成试剂盒合成cDNA，并行二次PCR扩增；将带有pcDNA 3.1(+)的菌株行扩增，摇菌，抽质粒，将扩增后的TGF β1 cDNA和pcDNA 3.1(+)进行酶切，将目的片段连接载体，转化E.coli DH5α感受态细胞，鉴定转化菌，Amp筛选，对阳性菌克隆提质粒，进行酶切鉴定。将阳性菌液送测序鉴定。 3、取第三代滑膜细胞，胰酶消化后制成细胞悬液，接种于6孔板，每孔细胞数为2×105，待细胞生长至80％融合时，按lipofectamine 2000试剂盒说明行pcDNA3.1-TGF β1质粒转染，同时取另一6孔板行pcDNA3.1(+)空质粒转染，上述两组分别为实验组和对照组，以同时未转染的细胞为空白对照组。实验组、实验对照组和部分空白对照细胞转染后48小时行G418筛选阳克隆，而后取部分阳性细胞行逆转录PCR检测TGF-β1基因的瞬时表达，同时取部分阳性细胞做细胞爬片，4％多聚甲醛固定后行TGF β1免疫组织化学染色(未转染细胞爬片做为空白对照)，其余细胞换液继续培养，G418维持筛选，每两天取部分细胞做细胞计数，连续12天，绘制细胞生长曲线，转染后3周，每周取部分细胞行细胞抗TGF β1和抗Ⅱ型胶原蛋白的免疫组织化学染色。 4、所有图片用Image-Pro Plus V6.0软件分析处理，根据申洪30图像分析公式，测算第7天时各组细胞爬片TGF β1表达的阳性单位以及第14天时各组细胞爬片Ⅱ型胶原表达的阳性单位，实验数据使用SPSS 13.0行统计学处理，三组间两两比较，采用方差分析，P值＜0.05有统计学意义。 结论 脂质体法重组pcDNA3.1-TGF β1基因可成功转染兔关节滑膜细胞，早期对细胞生长有一定影响，稳定期可恢复正常。G418维持筛选3周，转染细胞仍有增殖。转染细胞表达TGF β1，通过其自分泌、诱导作用，细胞分泌Ⅱ型胶原蛋白，表现出软骨细胞样生理特征，并向软骨细胞方向分化，滑膜细胞同其他间充质干细胞有共同的特征，即具有高度自我更新能力和多向分化潜能，可以为关节软骨损伤修复充当种子细胞。