昆虫抗菌肽(Antibacterial pepetides)，除对微生物具有广谱高效的抗菌活性外，还对某些病毒、原虫和癌细胞有抑制作用，并且不易产生抗药性。由于抗菌肽对人和畜禽安全无毒，可望成为抗生素药物的替代品，用于医学临床制药、畜禽病害防治和饲料添加剂等研发。 抗菌肽Gloverins对革兰氏阴性菌有抑制作用，对革兰氏阳性菌不敏感。其成熟肽分子量在17 kDa左右，属大分子抗菌肽，适于基因工程高效表达。2006年，本课题组韩冬完成了家蚕抗菌肽Gloverins基因家族5个成员原核系统中的克隆表达和抗菌活性鉴定，建立了实验室条件下目的蛋白的可溶性表达和分离纯化技术。2007年曹方的研究结果再次证实获得的重组表达菌株的稳定性较好，表达量高。 在此基础上，本研究挑选表达量高的pET—21d—BmGlov4/ E.coli Rosetta(DE3)菌株作为中试发酵的工程菌株，在BIOF—2000发酵罐中对4个主要发酵参数：培养基、pH值、菌液起始浓度和IPTG浓度进行优化。初步研究了原核表达家蚕抗菌肽Gloverins的中试发酵条件。为进一步家蚕Gloverins抗菌肽的应用开发研究做技术储备。获得的主要结果如下： (1)在BIOF—2000发酵罐中进行的发酵试验，采用溶解氧76％、发酵温度37℃，最大通气量及转速为600r/min。 (2)发酵培养基的优化：在其无机盐培养基和LB培养基的发酵产物中，两者BmGlov4蛋白的表达量无显著性差异。为降低生产成本，选择无机盐培养基作为发酵工程菌株的培养基。 (3)IPTG诱导培养的菌液起始浓度(OD600)优化：本次试验表明，在菌液起始浓度为OD600=18.112/16.89时，使用1 mmol/L IPTG诱导培养3h，表达的BmGlov4蛋白含量最高，占菌体总蛋白的37％左右。 (4)试验中发现：不用IPTG诱导培养也可以有效表达BmGlov4蛋白，在无机盐培养基、pH7.0、发酵培养物OD600=18.432时，目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的27.2％。为降低成本，可以选择不加IPTG诱导。 (5)经发酵纯化的BmGlov4蛋白对动物大肠埃希氏菌有抑制作用。