本研究对从地龙(蚯蚓)组织中提取的一种以脱氧核糖核酸酶(DNA酶)活性成分为主的多组分生物袪痰药物进行了有关制备工艺、生物活性、质量标准、主要药效学及毒理学等方面的研究,科学、较系统全面地论证了它作为一种新型的,原料来源广泛的,成本低廉的,用于呼吸系统疾病治疗的袪痰药物的可行性,研究结果证明,它具有高效、安全、疗效确切的作用特点,为下一步应用于临床治疗提供了丰富的实验数据和坚实的理论基础。一、制备工艺的研究经过反复筛选实验,最终得到了一条高效、稳定、快速的提取制备工艺路线,由此工艺从地龙组织中得到的具有袪痰作用的生物药物,最大程度地保留了DNA酶活性成分的生物学效应。在此工艺中,采取机械匀浆法进行蚯蚓组织破碎;pH4.6的缓冲液进行抽提;随后分别采取了有机溶剂沉淀、等电点沉淀、透析、超滤等一系列蛋白质提取纯化的方法,并在每一步操作后,均应用Bradford法对所得产物进行了总蛋白浓度测定;运用免疫酶单向扩散法对所得产物进行了DNA酶活力的测定,从而有力地保证了所得产物的质量。二、理化性质、主要生物学活性及质量标准的研究为了能够深入的了解地龙生物袪痰药物的理化性质,对其进行了多种理化性质稳定性的实验研究。实验结果显示,本药物耐酸、耐热;乙醇等有机溶剂不会破坏其生物学活性;常见的生物制剂(如血清、干扰素等)或生物酶类(如蛋白酶K、RNA酶A、溶菌酶等)不会对其活性产生抑制作用。为了能够探索本药物的作用机制,对其进行了生物学活性的检测。从检测结果可以看出,DNA酶是本药物中含量最丰富的成分,其比活力达到16.14 U/mg;同时还具有较强的蛋白酶、RNA酶及溶菌酶等活性,它们相互协同,共同发挥药理作用。结合以上实验数据与结果,进一步研究制定了地龙生物袪痰药物的质量标准草案,规定了检查、鉴别、效价测定等内容,为药物的生产提供了指导与标准,使产品的质量得到了监控与保障。三、药效学的实验研究通过对本药物有效成分的活性研究的结果可知,它是一种以DNA酶为主要成分的多组分生物药物,这决定了本药物具有多重药效学作用。在实验中使小鼠雾化吸入酚红生理盐水,通过检测小鼠气管洗液中的酚红吸光度来反映本药物对气管粘膜的分泌能力的影响;采用小鼠氨水引咳模型,说明本药物对此模型的小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数的影响;通过检测油酸所致急性肺损伤模型大鼠