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目的:原发性肝癌是常见的消化系恶性肿瘤。早期诊断率低、进展快、转移早、复发率高、预后差。血行和淋巴转移是肝癌术后高复发率的主要原因,也是影响肝癌术后生存率的主要因素,其原因与肝癌易侵袭转移的生物学特性密切相关。血管内皮生长因子家族(vascular endothelial growth factor family, VEGFs)在肝癌血行转移和淋巴转移中起重要作用,它包括VEGF-A(即通常所指的VEGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和PLGF (placenta growth factor,胎盘生长因子)。其中VEGF-D不仅存在于许多正常组织中,在多种肿瘤细胞内也有异常表达,在肿瘤的侵袭、转移方面有重要的作用。研究表明VEGF-D可诱导淋巴管生成,促进癌细胞淋巴扩散,因此又被称为淋巴管内皮生长因子。VEGFs的表达与多种细胞因子密切相关。白细胞介素2、6(Interleukin-2,IL-2、Interleukin-6,IL-6)是人体中常见的炎症介质,具有复杂的生物学功能,与血管内皮因子家族的表达密切相关。本研究采用逆转录聚合酶链式反应技术(reverse transcription polymerase chain reactin,RT-PCR)检测分析IL-2及IL-6刺激肝癌细胞株前后VEGF-D mRNA的表达,探讨其对人肝癌细胞VEGF-D表达的调节,进一步明确肝癌侵袭及转移机制,为肝癌新的治疗途径提供实验基础。方法:人肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721在37℃5%CO2的饱和湿度的无菌培养箱、RPMI 1640培养基中培养(含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素)。细胞株复苏、传代、细胞成稳定对数生长后,将培养液更换为含0.1%胎牛血清的RPMI 1640培养基继续培养12小时,以消除血清对细胞增殖的影响。然后分别更换为含有0.1μg/L、1μg/L、10μg/L、100μg/L、200μg/L的IL-2或IL-6的0.1%胎牛血清的培养基作为实验组,分别培养3、6、12、24小时,以加入等剂量的磷酸钠盐缓冲液(PBS)作为对照组,定时收取细胞后以Trizol一步法提取刺激前后细胞总RNA,以VEGF-D mRNA为模板,用RT-PCR技术测定刺激前后肝癌细胞VEGF-D基因表达,以β-actin作为内参照标准,分析刺激前后肝癌细胞株VEGF-D mRNA的表达。实验数据采用SPSS13.0统计软件进行分析。结果:1、IL-2对肝癌细胞株BEL-7402表达VEGF-D mRNA的影响。以不同浓度IL-2刺激后,与对照组相比,VEGF-D的扩增产物电泳条带亮度呈不同程度的减低;各实验组VEGF-D mRNA的表达量均低于对照组的表达量,在各浓度实验组之间VEGF-D mRNA的表达无统计学差异。各实验组同一浓度下不同作用时间VEGF-D mRNA的表达量无明显变化。可见,IL-2抑制肝癌细胞株BEL-7402 VEGF-D mRNA的表达,与IL-2的浓度及作用时间无明显关系。2、IL-2对肝癌细胞株SMMC-7721表达VEGF-D mRNA的影响。以不同浓度IL-2刺激后,与对照组相比,VEGF-D的扩增产物电泳条带亮度呈不同程度的减低;各实验组VEGF-DmRNA的表达量均低于对照组的表达量,并在0.1~100μg/L范围内与浓度成反比。在同一浓度下,不同作用时间的VEGF-D mRNA的表达量无明显变化。可见,IL-2抑制肝癌细胞株SMMC-7721 VEGF-D mRNA的表达,并在0.1~100μg/L范围内随浓度的增加,抑制作用逐步增强,但与作用时间无明显关系。3、IL-6对肝癌细胞株BEL-7402表达VEGF-D mRNA的影响。以不同浓度IL-6刺激后,与对照组相比,VEGF-D的扩增产物电泳条带亮度呈不同程度的增高;各实验组VEGF-D mRNA的表达量均高于对照组的表达量,在各浓度实验组之间VEGF-D mRNA的表达无统计学差异。各实验组同一浓度下不同作用时间的VEGF-D mRNA的表达量无明显变化。可见,IL-6促进肝癌细胞株BEL-7402 VEGF-D mRNA的表达,但与作用时间无明显关系。4、IL-6对肝癌细胞株SMMC-7721表达VEGF-D mRNA的影响。以不同浓度IL-6刺激后,与对照组相比,除0.1μg/L实验组外,其他各实验组VEGF-D的扩增产物电泳条带亮度呈不同程度的增加,实验组VEGF-D mRNA的表达量均高于对照组的表达量,并在1~200μg/L范围内与浓度成正比。1μg/L、10μg/L实验组与作用时间呈正相关。可见,IL-6促进肝癌细胞株SMMC-7721 VEGF-D mRNA的表达,并在一定浓度范围内促进作用与作用时间呈正相关。结论:1、IL-2抑制肝癌细胞BEL-7402和SMMC-7721 VEGF-D mRNA的表达,从而可能抑制肝癌淋巴转移。2、IL-6促进肝癌细胞BEL-7402和SMMC-7721 VEGF-D mRNA的表达,对肝癌作用有待进一步深入研究。