目的:本实验旨在比较研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和肌肽(carnosine)在中期保存兔角膜过程中,对角膜结构和功能的影响,探讨肌肽应用于角膜中期保存的可行性和有效性,以期改进中期角膜保存方法。方法:(1)以基础培养基MEM为主要成份、添加1%低分子右旋糖酐、2.5%硫酸软骨素、HEPES缓冲液、链霉素等配制中期角膜保存液。(2)在中期角膜保存液中加入bFGF和肌肽,分为A (bFGF 20 ng/ml)、B(肌肽5g/L)、C(bFGF 20 ng/ml+肌肽5g/L)三个实验组及对照组D组(未加bFGF及肌肽),各组于4℃下保存新西兰大白兔角膜,于保存第3、7、14天,30-35℃复温后,行角膜大体形态观察、台盼兰-茜素红联合染色、角膜组织病理切片、扫描电镜及透射电镜观察检测角膜内皮细胞活性,综合评价保存效果。(3)保存液存放期间定期行生化及细菌学检测,评价其生物安全性。结果:1、角膜大体形态观察:保存第3天,实验各组及对照组角膜均透明,无水肿、增厚,随着保存时间的延长,角膜透明度逐渐下降,出现不同程度水肿、增厚,保存第14天,对照组明显水肿增厚,透明度差;实验各组角膜亦有不同程度水肿增厚,但透明度尚可,其中以A、C组角膜透明度最好。2、台盼兰-茜素红联合染色:角膜保存第7、14天,实验各组与对照组相比,角膜内皮细胞形态较好,核蓝染细胞较少,角膜内皮细胞活性率较高(P<0.001),其中以实验A、C组角膜内皮细胞活性率最高,保存效果最好( P<0.001)。3、角膜组织病理切片:角膜保存第7、14天,实验各组与对照组相比,角膜组织结构较完整,基质层水肿程度较轻,内皮层与后弹力层贴附较紧密,无明显脱落。4、超微结构观察:角膜保存第14天,扫描电镜观察显示实验A、C组角膜内皮细胞呈六边形镶嵌结构,排列规则、Y型连接紧密、表面可见少量微绒毛;实验B组角膜内皮细胞呈较规则的六边形镶嵌结构,连接较紧密,见少量细胞融合及Y型连接断裂并存;对照组角膜内皮细胞大量坏死,坏死区无明显细胞结构,存活的内皮细胞明显肿胀,形态不规则,并有细胞融合及Y型连接断裂,胞膜不完整,胞质裸露。透射电镜观察显示实验组角膜内皮细胞胞体较大,胞质内有少量空泡,线粒体轻度水肿、内质网轻度扩张;对照组角膜内皮细胞变性坏死现象明显,胞质内有大量空泡形成,线粒体严重肿胀,内质网明显扩张,细胞核固缩。5、角膜保存期间,各组保存液均澄清,未见混浊及絮状沉淀。PH值稳定在7.2-7.4,细菌学培养结果均为阴性。结论:本实验在自制中期角膜保存液中添加bFGF(20 ng/ml)与肌肽(5g/l)保存兔角膜,可明显提高保存角膜的质量,延长保存时间,证实bFGF和肌肽均具有保护角膜细胞结构和功能的作用,二者均可以应用于角膜中期保存;但与bFGF相比,肌肽的保护作用相对较弱。