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家禽细菌性疾病多与革兰氏阴性菌有关,如沙门氏菌和大肠杆菌。抗生素类生长促进剂（AGPs）的使用对于降低细菌性疾病的风险和促进动物的生长具有重要作用,但长期使用AGPs会导致细菌产生耐药性、畜禽产品药物残留等危害。随着2020年AGPs全面退出饲料促生长类添加剂使用相关政策的明确,寻找新型安全的AGPs替代品成为当务之急。抗菌肽因其多靶点快速抑菌、抗菌谱广、不易使细菌产生耐药性等特性成为AGPs替代品的候选者之一。本试验首先在体外研究抗菌肽Api-PR19的杀菌效果和抗逆性,而后通过在肉鸡饲粮中添加抗菌肽Api-PR19,研究其对肉鸡的生长性能和肠道健康的影响,以期为抗菌肽Api-PR19在肉鸡无抗养殖中的应用提供技术支撑。试验一抗菌肽Api-PR19的体外杀菌活性和抗逆性研究本试验采用大肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、巴氏杆菌ATCC19427、幽门螺旋杆菌ATCC43504和金黄色葡萄球菌ATCC25923,利用微量稀释法和微生物比浊法,离体检测抗菌肽Api-PR19的最小抑菌浓度（MIC）和杀菌效果。以大肠杆菌为指示菌,利用不同温度、pH、蛋白酶处理抗菌肽Api-PR19后,检测其杀菌活性。结果显示:1)抗菌肽Api-PR19对大肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、巴氏杆菌ATCC19427、幽门螺旋杆菌ATCC43504和金黄色葡萄球菌ATCC25923的MIC分别是0.2、0.4、0.1、0.8和1.6μg/mL;2)抗菌肽Api-PR19在第4 h时,杀菌效能达到最高。1×MIC与10×MIC浓度的抗菌肽Api-PR19相比,杀菌效能并没有显著增加;3)不同温度处理抗菌肽Api-PR19的结果显示,随着温度的升高,抗菌肽Api-PR19的杀菌活性逐渐降低,在80℃时降低到原来杀菌活性的70%左右;不同pH处理抗菌肽Api-PR19的结果显示,随着pH值的降低,抗菌肽Api-PR19的杀菌活性逐渐降低,当pH=2时降低到原来杀菌活性的72%左右;不同蛋白酶处理抗菌肽Api-PR19的结果显示,胃蛋白酶（Pepsin,3000-3500 NFU）、胰蛋白酶（Trypsin,250 NFU）和α-糜蛋白酶（α-chymotrypsin,1200 U）处理抗菌肽Api-PR19后,其杀菌活性分别降低到原来的52%、63%和82%左右。本试验结果表明,抗菌肽Api-PR19在体外对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、巴氏杆菌、幽门螺旋杆菌的生长有较好的抑制效果,对金黄色葡萄球菌的生长有一定抑制作用。抗菌肽Api-PR19具有耐高温、耐强酸的抗逆性特点,对α-糜蛋白酶和胰蛋白酶具有较好的抗性,但对胃蛋白酶较为敏感。试验二饲粮添加抗菌肽Api-PR19对肉鸡生长性能的影响本试验选用1日龄艾拔益加（AA）肉鸡630只,随机分为5个处理,每处理7个重复。5个处理分别为:1)对照组（CON）饲喂不含抗生素的基础饲粮;2)抗生素组（AGP）饲喂基础饲粮和4.96 mg/kg恩拉霉素;3)低剂量组（AP1）饲喂基础饲粮和100 mg/kg抗菌肽Api-PR19;4)中剂量组（AP2）饲喂基础饲粮和200 mg/kg抗菌肽Api-PR19;5)高剂量组（AP3）饲喂基础饲粮和300 mg/kg抗菌肽Api-PR19。结果显示:1)饲粮添加抗菌肽Api-PR19显著降低了肉鸡饲养前期（1-21 d）和饲养全期（1-42d）的料重比（P<0.05）,对饲养后期的料重比有改善的趋势（0.05<P<0.10）,且AP2组的料重比最低;2),饲粮添加抗菌肽Api-PR19对肉鸡胸腺指数、脾脏指数和42 d法氏囊指数无显著性影响,但AP1和AP2组显著降低了肉鸡第21 d法氏囊指数（P<0.05）;3)饲粮添加抗菌肽Api-PR19对肉鸡各阶段流感亚型H5抗体水平和第14、21、28 d肉鸡的亚型H9抗体水平无显著改善作用（P>0.05）,但显著提高了第7 d肉鸡亚型H9抗体水平;4)由预测肉鸡饲粮中抗菌肽Api-PR19的最适添加水平回归方程得知,饲养前期抗菌肽Api-PR19的最适添加剂量为267.0 mg/kg（R2=0.424）,饲养后期的最适添加量为222.9 mg/kg（R2=0.325）。本试验结果表明,饲粮添加抗菌肽Api-PR19能够提高肉鸡生产性能,并为肉鸡早期免疫防线构建与完善起一定促进作用。试验三饲粮添加抗菌肽Api-PR19对肉鸡肠道健康的影响本试验分别于第21和42 d采集肉鸡十二指肠、空肠和回肠肠道黏膜样品和盲肠食糜样品。用4%的多聚甲醛固定第21和42 d冲洗后的十二指肠、空肠和回肠,固定好的肠段制成切片,经过苏木精-伊红（HE）染色,检测肠道形态;黏膜样品通过RT-qPCR技术测定肠道葡萄糖转运载体和氨基酸转运载体的mRNA表达水平;通过免疫组化检测分泌型免疫球蛋白（sIgA）在各肠段的表达情况;通过微生物的绝对定量,检测盲肠细菌总数和特定微生物数量。结果显示:1)抗菌肽Api-PR19对回肠肠道形态有显著改善作用;对饲养后期肉鸡（22-42 d）的十二指肠肠道形态有显著改善作用;2)抗菌肽Api-PR19显著上调了第21 d肉鸡十二指肠黏膜葡萄糖转运载体（GLUT2）和氨基酸转运载体（rBAT、y+LAT2、CAT1）基因相对表达量（P>0.05）,而对第42 d各肠段营养物质转运载体基因相对表达量无显著影响;3)抗菌肽Api-PR19对第21d和42 d肉鸡空肠及第21 d肉鸡十二指肠sIgA的分泌有改善作用（P>0.05）;4)抗菌肽Api-PR19显著减少了后期肉鸡盲肠有害菌大肠杆菌和空肠弯曲杆菌的数量（P>0.05）,并一定程度上维持了盲肠微生物的丰度。本试验结果表明:抗菌肽Api-PR19可改善肉鸡肠绒毛组织形态,增加小肠对营养物质的吸收,增强小肠免疫,并且减少盲肠有害微生物的数量,维持肠道微生态平衡,综合改善了肠道健康。综上所述,抗菌肽Api-PR19在体外有良好的杀菌效果和消化道抗逆性。抗菌肽Api-PR19在肉鸡饲粮中的添加改善了肉鸡肠绒毛组织结构,增加了小肠营养物质转运载体的表达,减少盲肠有害菌的数量,维持肠道微生态平衡,提高了肉鸡的生产性能。