microRNA-146a介导宿主防御布氏菌侵染的作用机制研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:conan_1126
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目的:探讨microRNA-146a(miR-146a)表达与宿主防御布氏菌感染之间的关系并分析其作用机制。  方法:以人工合成的miR-146a模拟物为模板建立扩增miR-146a的标准曲线。提取布病患者与健康志愿者血清的总RNA,经反转录后进行实时定量PCR(qRT-PCR)扩增miR-146a。比较分析患者与健康志愿者之间miR-146a的表达差异;分别比较患者血清抗体滴度、发病天数及临床症状与miR-146a表达水平的相关性。用羊种布氏菌16M株感染小鼠巨噬细胞,从细胞裂解液中提取总RNA,运用qRT-PCR对miR-146a的表达水平进行检测。构建小鼠布氏菌16M感染模型,提取脾脏总RNA进行荧光定量PCR扩增,观察小鼠脾脏中miR-146a表达情况。分别将miR-146a模拟物(mimics)、抑制物(inhibitor)转染Hela细胞,比较转染后布氏菌生长情况。  结果:患者血清中miR-146a表达明显受到抑制,与健康志愿者相比差异具有统计学意义(P<0.001);血清抗体滴度与miR-146a表达呈负相关性,不同滴度组间差异具有统计学意义(P<0.05);miR-146a表达与患者发病时间无关(P>0.05);发热和出汗症状与miR-146a浓度相关(P<0.05),而乏力、关节痛和腰背痛症状与miR-146a表达水平无相关性(P>0.05);小鼠巨噬细胞感染布氏菌组miR-146a的表达在0h和24h受到显著抑制,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);小鼠感染模型组miR-146a的表达与对照组各时间点相比明显降低,两组间差异具有统计学意义(P<0.01);Hela细胞转染miR-146a模拟物mimics与抑制物inhibitor后,感染16M组在4h与8h细菌生长与空白组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);感染16M△virB组在4h时mimics组细菌生长对比空白组差异具有统计学意义(P<0.05),在8h时inhibitor组细菌生长对比空白组差异具有统计学意义(P<0.05)。  结论:人体感染布氏菌后miR-146a的表达受到抑制。miR-146a在宿主抵御布氏菌感染中具有重要作用,参与抑制布氏菌在胞内生存,有望成为布鲁氏菌病诊断新的、潜在的诊断标志。
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