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为了对带三蛋白的结构与功能有更为深刻的了解,我们采用酵母表面展示系统,表达不同长度的带3蛋白膜段结构域片断至酵母细胞膜并进行氯离子转运功能的测定.结果表明某些表达后的片段拥有离子转运的活性且其活性能被带三蛋白抑制剂DIDS抑制.利用PCR方法,以pFAST-Bac-mdb3为模板扩增出带3蛋白膜段结构域的六种截断突变体,分别包含带三蛋白膜段域不同跨膜α螺旋(TM),TM1-8(包含TM1-TM8),TM1-9,TM1-10,TM1-11,TM1-12,TM1-13.测序后将其克隆至表达载体pYD1上,从而构建出酵母表达质粒pYD1-Trunc8/Trnuc9/Trunc10/Trunc11/Trunc12/Trunc13.首先诱导前三组突变体的蛋白质表达,然后分别测定其Cl-的转运活性,并以完整的带三蛋白膜段域蛋白AE1,包含完整的带三蛋白14个TM但删除C尾端最后16个氨基酸的D16作为对照,结果发现拥有前10个跨膜α螺旋的带3蛋白片段TM1-10具有微弱的氯离子转运活性,而TM1-8,TM1-9则完全失去功能.而删除C端最后16个氨基酸的带三蛋白片段功能与拥有全长膜段域的带3蛋白相仿.说明TM10是带三蛋白重要的结构基础,也表明TM1-10可能能组装成与天然蛋白膜段域相近的有一定活性的构象.此外,为研究As<,2>O<,3>对带三蛋白的影响,该实验利用该室前期构建的包含完整的带三蛋白膜段域蛋白的载体pYD1-AE1及包含完整的14TM但删除C尾端最后16个氨基酸的带三蛋白片段的载体pYD1-D16,在酵母细胞分别进行诱导表达,经western鉴定后,测定其离子转运活性,并比较样本在一定浓度的As2O3作用下蛋白功能的变化情况,发现一定浓度的As<,2>O<,3>的存在可大大增强拥有完整膜段域的带三蛋白的离子转运功能,但对删除最后16个氨基酸的D16离子转运促进效果则大为减弱.这证明As<,2>O<,3>能直接激活带三蛋白的离子转运功能,也提示带三蛋白的C末端可能存在带三蛋白的作用位点.上述研究结果不仅进一步揭示了带3蛋白膜段域片断的结构和功能的关系,同时也为进一步研究带3蛋白在疾病、肿瘤发生和凋亡过程中的作用提供了线索和依据.