【摘 要】
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目的:研究IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者与健康对照者中尿外泌体miRNA表达谱的差异性分析,筛选并验证尿外泌体miRNA是否可以作为评估IgAN的新型的生物标志物,并对外泌体miRNA在IgAN中的临床诊断价值进行评估。方法:收集29例IgAN患者和29例健康人的尿液,选取其中9例IgA肾病患者和9例健康人的尿液利用高通量测序技术筛选差异表达的miRNA,采用实时荧光定
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目的:研究IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者与健康对照者中尿外泌体miRNA表达谱的差异性分析,筛选并验证尿外泌体miRNA是否可以作为评估IgAN的新型的生物标志物,并对外泌体miRNA在IgAN中的临床诊断价值进行评估。方法:收集29例IgAN患者和29例健康人的尿液,选取其中9例IgA肾病患者和9例健康人的尿液利用高通量测序技术筛选差异表达的miRNA,采用实时荧光定量(Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)方法检测20例IgA肾病患者和20例健康对照人的尿液对候选miRNA进行验证。并根据受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic,ROC曲线)评价尿外泌体miRNA对IgAN的临床诊断价值。采用Spearman相关分析候选miRNA与临床指标的相关性。结果:我们使用外泌体提取试剂盒法和超速离心法成功地提取出了外泌体,并通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测到外泌体膜表面的标记蛋白CD63和CD9。在透射电子显微镜下明显地观察到了外泌体的形态和典型的结构。通过高通量测序筛选出差异表达的miRNA,结果发现和健康对照组相比IgAN中有7个上调的miRNA,使用RT-qPCR对候选的miRNA进行验证,hsa-miR-451a和hsa-let-7d-3p在IgAN表达中明显高于健康对照组,与高通量测序的结果一致,使用ROC曲线评估尿外泌体miRNA在IgAN中的临床诊断价值。hsa-miR-451a(曲线下面积Area under curve,AUC=0.805,P=0.001),hsa-let-7d-3p(AUC=0.76,P=0.0049),hsa-miR-451a和hsa-let-7d-3p结合(AUC=0.8125,P=0.0007),hsa-miR-451a与Lee’s grades(r=0.511,P=0.021),24-h尿蛋白定量(24-hour urinary protein quantification,UPQ)(r=0.557,P=0.011)有相关性;hsa-let-7d-3p与Lee’s grades(r=0.6,P=0.005),UPQ(r=0.518,P=0.019),血肌酐(Serum creatinine,Scr)(r=0.564,P=0.01),肾小球滤过率(Estimated glomerular filtration rate,e GFR)(r=-0.532,P=0.016)有相关性。根据牛津分型,对于hsa-miR-451a,S0低于S1(P=0.016);hsa-let-7d-3p,M0低于M1(P=0.05)。结论:与健康对照组相比,IgAN患者中尿外泌体miRNA的表达具有明显的差异性,hsa-miR-451a和hsa-let-7d-3p可能作为评估IgAN的新型的非侵入性的生物标志物。
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