哈蟆油(Oviductus Ranae)为脊索动物门(Chordata)两栖纲(Amphibia)蛙科(Ranidae)林蛙属(Rana)动物中国林蛙(Rana temporaria chensinensis David)雌蛙的输卵管,经过采制干燥而得,又名田鸡油、林蛙油、哈士蟆油、雪蛤膏等,主产于吉林、黑龙江、辽宁等省。哈蟆油性平,味甘、咸,归肺、肾经,具有补肾益精,养阴润肺的功效。传统的哈蟆油鉴别方法主要是来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定,这些以形态学为基础的鉴别方法简便、易行,是行之有效的哈蟆油鉴别方法。但这些鉴别方法是以哈蟆油的遗传表现型为基础而建立起来的,不仅受到遗传因素的影响,而且与中国林蛙的生长发育阶段、自然环境及人类活动等有着密切的关系,其遗传表现型的变异性较大,同时在鉴别过程中容易受主观因素的影响,重复性和稳定性较差等,从而影响鉴定结果的可靠性。2010版《中国药典》规定的哈蟆油鉴定方法主要是性状鉴定、高效液相色谱法鉴定及膨胀度测定法,其中膨胀度测定易受水温、浸泡时间等因素的影响,且哈蟆油膨胀倍数个体差异较大,鉴别效果也不太理想。DNA分子是生物体遗传信息的载体,在同一物种内遗传稳定性高,而且不容易受周围环境因素、器官组织差异及生物体发育阶段的影响,因此用DNA分子特征作为遗传标记进行中药鉴定更为准确可靠,非常适用于近缘物种、易混淆物种、珍稀物种、动物药材等的中药鉴定。为了探索哈蟆油更为快速、准确的鉴别方法,本文主要进行了以下几个方面的研究：1在查阅文献的基础上,系统总结了哈蟆油的化学成分、药理作用、质量控制研究现状及分子生物学技术在中药材鉴定领域的应用和发展趋势。2采用SDS法提取哈蟆油及其伪品黑龙江林蛙油、青蛙油、蟾蜍油、牛蛙油的基因组DNA,运用超微量快速核酸蛋白测定仪对其进行浓度测定和质量检测,同时采用0.7%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA样品。参考5对CHD基因引物序列,设计引物对基因组DNA进行PCR,筛选出2对能扩增出明显条带的引物,对扩增结果进行分析比较,初步建立一种哈蟆油的PCR鉴别方法。采用筛选出的引物F4/R4和F2/R2对30种哈蟆油类未知粉末进行PCR鉴定,从而验证该鉴别方法的可靠性。3采用SDS法提取吉林、内蒙、陕西、青海、朝鲜和辽宁产哈蟆油的基因组DNA,运用超微量快速核酸蛋白测定仪对其进行浓度测定和质量检测,同时采用0.7%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA样品。采用筛选出的2对引物F2/R2和F4/R4对不同产地的哈蟆油基因组DNA进行PCR,2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,分析比较各个产地扩增片段多态性差异。