马尾松（Pinus massoniana Lamb）是我国南方特有的乡土树种,为主要的用材树种之一,木材材质好可作用建筑材料,木材纤维长还可用于造纸,具有极高的经济价值与生态效益。但是马尾松的育种研究起步较晚,育种周期长,存在着品种选育率低等问题。因此,建立马尾松良种快繁技术体系,为生产上提供急需的、性状优良、稳定、遗传增益高的优质苗木,大幅度提高单位面积林地产量和林木质量,是当前为提高马尾松产业经济效益急需解决的关键问题。以胚乳为材料进行组织培养有望获得单倍体材料,通过单倍体育种具有快速纯合基因、缩短育种年限、提高育种效率等优势,可与多种育种技术相结合,加快育种研究。本文以马尾松胚乳为材料进行组织培养研究,主要研究结果如下:1、马尾松胚乳材料的消毒适用方法为75%酒精30s+2%Na Cl O 15min。马尾松胚乳愈伤组织诱导中,DCR+NAA2mg/L+6-BA1mg/L表现最佳,诱导率达68.75%。在不含细胞分裂素的培养基中接入6-BA浸泡处理后的外植体,能有效增加愈伤组织诱导率,在6-BA浓度为1mg/ml时诱导率最高为87.77%,而其他细胞分裂素如TDZ、KT等在浓度0.5mg/ml～1mg/ml反而对愈伤组织诱导有抑制作用。研究还发现马尾松的胚乳愈伤组织发生困难且缓慢,愈伤组织最快也是第四周才开始逐渐形成,在前三周会出现假愈伤组织化状态,肉眼观察时切割面突起如愈伤组织,但实质只是胚乳细胞消耗能量物质且膨大的现象。2、马尾松胚乳愈伤诱导培养基以DCR+NAA2mg/L+6-BA1mg/L为基础,再辅以以下条件为最佳:a)培养基中蔗糖浓度在20g/L～30g/L较适宜;b)PH在5.5时最适宜,过高或过低都会导致愈伤诱导率下降;c)培养基中琼脂浓度对培养基质地产生影响,最适宜琼脂浓度为7g/L;d)土豆泥与香蕉泥在马尾松胚乳愈伤组织诱导中有抑制作用,不宜添加;椰子汁在浓度10～70ml/L内,对愈伤诱导有一定促进作用,在浓度为70ml/L时效果最佳;e)热激处理可以加快马尾松胚乳愈伤组织打破假愈伤组织化的时间,并且热激后的愈伤诱导情况更加良好,最佳的热激温度为45℃,热激时间为10min。3、马尾松胚乳愈伤组织的最佳增殖继代培养基为,WPM+NAA 0.1mg/L+2,4-D 0.1 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,此时愈伤组织为浅绿色,具有较高水平的抗氧化酶活性,具有更强的分化能力。马尾松胚乳愈伤组织不定芽分化困难,仅在培养基WPM+NAA 0.1mg/L+KT 2mg/L能诱导出不定芽。在不定芽的增殖与伸长中,6-BA在其中起到关键作用,6-BA浓度为0.1mg/L时,不定芽增殖,但伸长不明显,当6-BA浓度增加至0.5mg/L时,不定芽开始伸长。4、继代次数对马尾松胚乳愈伤组织染色体倍性有较大影响,随着培养时间的增加,马尾松胚乳愈伤组织中的单倍体细胞比例逐渐减少,二倍体细胞比例逐渐提高,甚至出现了多倍体细胞。2,4-D对马尾松胚乳愈伤组织染色体变异也有较大影响,随着2,4-D浓度的增加,染色体数目变异的比例也提升了。此外,总生长素浓度越大染色体变异程度也越大。5、通过对马尾松胚乳的培养,成功诱导出了不定芽,并通过染色体压片对该不定芽进行了染色体倍性鉴定,其染色体倍性表现为自然加倍的二倍体。