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干扰素通过结合相应的受体亚基才能行使其潜在的生理功能，所以干扰素受体在抗病毒信号通路中发挥着不可替代的介导作用。I型干扰素受体是II型细胞因子受体，它有两个不同的亚基组成，在细胞抵御病毒感染的过程中起到了关键的信号传递。在哺乳动物细胞中干扰素能够介导JAK-STAT信号传导途径。JAK1和TYK2作为JAK家族的重要成员，参与到这个信号通路发挥激酶功能。哺乳动物的细胞被病毒等诱导产生的I型干扰素分泌到细胞外，结合并激活靶细胞的I型IFN受体IFNAR1和IFNAR2从而招募胞内的JAK1和TYK2，耦联的酪氨酸激酶区发生相互磷酸化，激活的JAK磷酸化受体胞内域形成“停泊位点”，胞内信号传递招募STAT1和STAT2，进而激活I型干扰素抗病毒信号通路。 实验室早期关于草鱼I型干扰素受体亚基分子特征的研究发现，它由两个受体亚基组成包括CiCRFB1和CiCRFB5。CiCRFB1(KF255603)和 CiCRFB5(KF460272)分别与人类、鸡、斑马鱼和河豚具有很高的同源性，并且与哺乳动物其它亚基相比，CiCRFB1和CiCRFB5表现出和IFNAR2及IFNAR1有更高的同源性。 本次的研究内容主要集中在CiCRFB1和CiCRFB5与CiJAK1和CiTYK2的关系，我们通过同源克隆策略和RACE-PCR技术克隆和鉴定了草鱼JAK1(CiJAK1)和TYK2(CiTYK2)。CiJAK1(KT724352.1)的全长cDNA为3829bp，包括一个3465bp的开放阅读框(ORF)，编码一个具有1154氨基酸的蛋白。CiTYK2(KT724353.1)的全长cDNA为4337bp，具有一个3168bp的开放阅读框(ORF)，编码1055个氨基酸。在结构上，它们共同拥有B41、SH2、TyrKc和TyrKc等4个结构域。系统进化树显示CiJAK1和CiTYK2与鱼类具有较高的同源性，尤其是斑马鱼和鲤鱼。 在鱼类体内，活化的JAK1和TYK2通过激活干扰素受体的胞内域和STAT的特定结构域来执行其潜在的生物功能，这一生理现象和哺乳动物存在很多相似之处。Poly I:C是一种合成的dsRNA类似物，可以启动细胞抗病毒信号通路。为了阐明Poly I:C在鱼类细胞中引发抗病毒信号传导途径的分子机制，我们用Poly I:C刺激CIK细胞，然后在10％SDS-PAGE上分离细胞裂解物。为了获得CiCRFB1、CiCRFB5、CiJAK1和CiTYK2的多克隆抗体，我们分别截段构建了它们的原核表达载体，表达并纯化重组蛋白免疫大白兔。分析比较CiJAK1和CiTYK2的磷酸化位点，购置的人源JAK1和TYK2磷酸化抗体检测蛋白的磷酸化水平。蛋白质印迹实验表明，Poly I:C在显著诱导CiJAK1和CiTYK2细胞表达水平的基础上，还上调了CiCRFB1和CiCRFB5及CiJAK1和CiTYK2的激活水平。其中，p-CiJAK1和p-CiTYK2的水平在Poly I:C诱导3h后显著上调；然而，CiCRFB1和CiCRFB5的磷酸化水平在诱导12h后出明显的上调。作为JAK-STAT信号通路反馈调节的基本机制，细胞转染实验的结果表明，CiCRFB1和CiCRFB5在CIK细胞中的过表达同时促进了CiJAK1和CiTYK2的磷酸化。