IFITs家族是干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)家族的重要成员,大多数IFITs基因都由2个外显子组成。在正常情况下,细胞中不表达IFITs基因,但在干扰素、病毒、微生物的病原相关分子模式等的刺激下,IFITs基因高效、快速表达。对IFIT2的研究多是在人和小鼠上进行的,目前尚未见有关猪IFIT2的研究报告。本课题组在前期的研究中,克隆了猪IFIT2基因并对其启动子活性区进行了初步分析,发现-1836~-1661 bp和-389~-310bp分别存在着负调控元件,-1661~-1397 bp和-310~-126 bp分别存在着正调控元件。为了进一步确定猪IFIT2基因的转录调控元件,本研究在生物信息学预测的基础上,采用真核表达和双荧光素酶报告系统,在体外培养的PK15细胞内分析相应序列缺失对启动子活性的影响。得到的主要研究结果如下:(1)生物信息学分析发现,在-1838~-1661 bp中存在Delta EF1元件。在-1661~-1579 bp中存在1个ISRE(ISREIII)元件。在-389~-310 bp中存在Id3结合位点。在-310~-126 bp中存在2个ISRE元件(ISREI和ISREII)和2个NF-kappa B结合位点(NF-kappa BI和NF-kappa BII)。(2)利用重叠延伸PCR方法对猪IFIT2启动子区不同元件进行了缺失突变,获得ΔDelta EF1、ΔISREIII、ΔId3-ttg、ΔId3、ΔISREI、ΔISREII、ΔISREI-II、ΔNF-Kappa BI、ΔNF-Kappa BII、ΔNF-Kappa BI-II、ΔNF-Kappa BI+ISREI-II、ΔNF-Kappa BII+ISREI-II、ΔNF-Kappa BI-II+ISREI-II元件缺失的突变体,并以p GL3-Basic为载体骨架,成功构建了荧光报告基因质粒:p GL3-ΔDelta EF1、p GL3-ΔISREIII、p GL3-ΔId3-ttg、p GL3-ΔId3、p GL3-ΔISREI、p GL3-ΔISREII、p GL3-ΔISREI-II、p GL3-ΔNF-Kappa BI、p GL3-ΔNF-Kappa BII、p GL3-ΔNF-Kappa BI-II、p GL3-ΔNF-Kappa BI+ISREI-II、p GL3-ΔNF-Kappa BII+ISREI-II、p GL3-ΔNF-Kappa BI-II+ISREI-II。(3)双荧光素酶报告系统分析表明,Delta EF1抑制猪IFIT2基因转录,NF-kappa Bs促进转录,ISREs是正调控转录的顺式作用元件。并且在-310~-126 bp区,2个ISIREs间、2个NF-Kappa Bs间以及NF-Kappa B与ISRE间存在着协同作用。