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本研究包括2个试验,用于研究主动免疫重组绵羊β2-肾上腺素能受体(β2-adrenoceptor,β2-AR)第二细胞外环融合蛋白对大鼠生长性能、屠宰和内脏指标、血清生化指标的影响。主要研究工作如下:重组绵羊β2-AR的表达、纯化与鉴定本试验对不同诱导时间、诱导剂IPTG终浓度、培养温度和振荡培养箱转速等4个诱导培养条件对绵羊β2-AR第二细胞外环重组质粒pET32C-AR/Se在大肠杆菌BL21(DE3)中表达水平的影响进行了研究,以筛选其最佳培养条件。利用Ni-IDA柱层析以及盐酸胍梯度透析对目标蛋白进行纯化,采用SDS-PAGE和western blotting对目的蛋白进行了鉴定。研究结果表明,随着IPTG诱导时间的延长,重组绵羊β2-AR第二细胞外环的相对表达量逐渐增加,在2 h时相对表达量达到最大值,为菌体总蛋白的30.1%。IPTG终浓度在0.01~2 mmol/L之间时,重组绵羊β2-AR第二细胞外环的相对表达量水平均在27~30%左右;当IPTG终浓度为0.01 mmol/L时重组绵羊β2-AR第二细胞外环的相对表达量最高,占菌体总蛋白的30.5%。在设置的4个诱导温度中,25℃时重组绵羊β2-AR第二细胞外环的相对表达量最高,占菌体总蛋白的35.5%。在振荡培养箱不同转速条件下,重组绵羊β2-AR第二细胞外环的相对表达量在33~40%之间波动;在200 rpm时,相对表达水平最高,为细菌总蛋白的40.0%。通过SDS-PAGE和western blotting鉴定发现分子量大约在26 kD左右。绵羊β2-AR第二细胞外环基因在大肠杆菌中的表达最佳条件为:重组菌株在LB液体培养基中生长至OD600 0.5左右时,加入IPTG至终浓度0.01 mmol/L,于25℃、200 rpm诱导120 min。主动免疫重组绵羊β2-AR对大鼠生长及血清生化指标的影响选用175 g左右的wistar雌性大鼠45只,随机分为3组,分别对照组、免疫组和激动剂组。对照组和免疫组分别免疫佐剂和重组绵羊β2-AR,在试验开始后第二周初次免疫和第四周进行加强免疫;激动剂组从试验开始第三周添加盐酸克伦特罗(3 mg/kg)。所有组在第六周后采血并屠宰,测定屠宰和内脏指标及血清生化指标。结果表明:主动免疫重组绵羊β2-AR对大鼠体重和采食量均没有显著影响;与对照组相比,免疫组大鼠肝脏和肺重分别增加13.83%(P<0.05)和18.46%(P<0.05);腹脂重量有减少的趋势,比对照组减少了12.20%(P=0.11)。主动免疫重组绵羊β2-AR使大鼠血清尿素氮、甘油三酯和总胆固醇水平分别降低了9.68%(P<0.05)、20.21%(P<0.05)和8.81%(P=0.087)。由此可见:主动免疫重组绵羊β2-AR不影响大鼠采食量和体增重,但具有减少体蛋白分解,并促进体脂脂解的作用。