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本试验首先运用 PCR-SSCP技术对布莱凯特黑牛瘦素（leptin）基因编码区序列的单核苷酸多态性（SNPs）进行检测；然后对肌内脂肪含量进行测定，用最小二乘法拟合一般线性模型分析leptin基因SNPs对肌内脂肪含量的影响；最后利用RT-PCR、酶切等技术构建了pET28a-leptin原核表达载体，并对表达产物进行鉴定。 1.登陆GenBank，参考安格斯牛leptin基因序列（ID:280836），设计2对引物分别扩增88头布莱凯特黑牛leptin基因的外显子2和外显子3片段，对PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳并根据条带类型进行克隆测序，结果发现leptin基因外显子2的PAGE图中出现不同类型条带。测序结果显示leptin基因第73位点存在T/C突变，该突变导致氨基酸由半胱氨酸突变为精氨酸，该位点多态信息含量为中度多态，卡方检验发现，基因型频率不符合Hardy-Weinberg平衡（?2≥2010.?，P≤0.01）。外显子3不存在不同基因型。 2.对试验一中39头布莱凯特黑牛的肌内脂肪含量进行了测定.采用索式提取法对每个样品测定3次。应用SPSS17.0软件进行统计分析。结果发现AA、AB及BB基因型的肌内脂肪含量分别为11.93±0.46；12.28±0.36；16.18±0.54。BB基因型的肌内脂肪含量最大，AB基因型次之，AA基因型最小。差异显著分析结果显示AA、AB基因型个体的肌内脂肪含量与BB基因型间差异显著（P＜0.05），而AA与AB基因型的肌内脂肪含量差异不显著（P＞0.05）。 3.采用 TRNzol法提取布莱凯特黑牛脂肪组织总RNA，设计带有EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的1对引物并利用RT-PCR获取Leptin基因编码区序列，回收PCR产物并克隆到载体pMD19-T。利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切pMD19-T-leptin和pET28a空载体，回收目的片段并采用T4连接酶连接，转化BL21（DE3）感受态进行IPTG诱导表达，以空PET28a载体转化的BL21菌液为对照组。经SDS-PAGE电泳和Western-blot检测，结果表明原核表达载体pET28a-leptin成功表达出leptin重组蛋白。 综上所述，本研究检测出布莱凯特黑牛leptin基因的1处非同义突变位点，该位点与肌内脂肪含量存相关性，为分子标记辅助育种工作提供依据。构建了原核表达载体 pET28a-leptin并成功表达，为leptin在畜牧业上的应用提供一定的研究基础。