通过转基因提高浮萍抗逆性及表达药物蛋白IL-6的研究

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普通浮萍(Lemna minor)属于浮萍科浮萍属,为单子叶水生漂浮植物。众多研究显示浮萍是一种很好的净化水质的水生植物,它可以快速吸收和转化污水中的N、P以及可以耐受多种污水环境,而且在治理水体污染的同时可以美化水体环境,达到了生态型水体景观保证污水净化和绿化覆盖率的要求。天津地处海河下游,湿地资源丰富,但水体环境呈现出盐度加重、弱碱性面积增大的现象,水体盐碱化严重,并且伴随不同程度的污染,对水生植物的生长发育极其不利。  因此,本研究拟通过在浮萍中过表达大豆(Glycine max L.)液泡膜抗盐基因Na+/K+ antipoter GmNHX1(载体pGN-GmNHX1)来增强浮萍的抗盐性,以期获得能够应用于盐碱水域生长,并净化污水的浮萍株系。在稳定和优化浮萍组培和侵染体系的基础上,通过农杆菌介导的遗传转化方法,对浮萍的愈伤组织进行了侵染,经抗性筛选和分子鉴定,目前已获得三个转GmNHX1的浮萍株系,初步的生理测定表明转GmNHX1基因的浮萍株系的抗盐性增强。  同时,由于浮萍具有生长迅速、结构简单、生长条件易于控制、外源蛋白表达量高且易于提取等优点,已被成功用于植物生物反应器方面的开发和生产。因此,本课题还以浮萍作为生物反应器研究了外源药用蛋白的表达。在克隆了拟南芥核酮糖一1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基(rbcS)转移肽编码序列(RS)DNA的基础上,将其与目的基因IL-6连接构建了叶绿体定位表达载体pGN-RS-IL-6,用农杆菌介导的遗传转化方法侵染浮萍愈伤组织,获得转IL-6基因浮萍,经抗性筛选和分子鉴定,获得6个稳定的转基因株系。RT-PCR结果显示IL-6基因已在浮萍中转录,IL-6的表达量及其生理活性正在进一步研究中。
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