参照Hlc基因序列设计干扰Hlc基因的干扰片段,构建表达载体,通过脂质体介导法,用构建的干扰质粒对水牛皮肤胎儿成纤维细胞的转染体系进行了优化,优化出的条件为质粒浓度2μg/ml、脂质体浓度5μl/ml、复合物共孵化时间30min,优化后的转染效率为30.87%。接着,通过脂质体将3个干扰水牛Hlc基因质粒和1个阴性对照质粒转入水牛胎儿皮肤成纤维细胞,并用qPCR检测了其转染24h和48h的水牛Hlc基因表达情况,以确定其干扰效果。结果表明,构建的3个干扰Hlc质粒都能在不同程度上下调水牛Hlc基因表达,而且在转染48h比转染24h下调水牛Hlc效果好。接着,为了研究下调Hlc表达后对水牛胎儿皮肤成纤维细胞生长的影响,将干扰质粒分别转染水牛胎儿皮肤成纤维细胞,观察转染后24h和48h的细胞生长状态。结果下调Hlc表达后,细胞生长受到抑制,甚至死亡,这表明水牛Hlc基因的表达对细胞生长分裂有着重要作用。随后,为了筛选出稳定转染的细胞,对培养至7代的水牛胎儿皮肤成纤维细胞进行杀稻瘟菌素药敏性检测,得到10天内杀死全部细胞的最低浓度为2.6μg/ml。用三种构建的干扰质粒通过脂质体以优化转染条件对水牛胎儿皮肤成纤维细胞进行转染,转染后用药物筛选以获得纯化的转染细胞,但只有空质粒转染的细胞长出克隆斑,而其他三种干扰质粒转染细胞在药物筛选过程中都死亡,可能是其干扰了细胞内源基因影响了细胞生长和分裂。本研究通过qPCR验证了构建的3个干扰载体都能有效下调水牛体细胞H1c基因表达,并通过脂质体介导法将载体转入水牛胎儿皮肤成纤维细胞,从而下调细胞H1c基因的表达,结果表明下调H1c基因表达能影响细胞的正常分裂和生长,甚至导致细胞死亡。综上所述,Hlc在水牛胎儿皮肤成纤维细胞增殖和生长中起着重要的作用。