论文部分内容阅读
目的研究微波辐射对原代培养的小鼠皮肤成纤维细胞增殖活性的影响,进而分析微波辐照后成纤维细胞的基因及蛋白的变化,探讨微波对伤口修复阶段瘢痕形成的影响。方法建立小鼠皮肤成纤维细胞原代培养的方法,经不同强度微波直接辐射细胞不同时间后,用MTT法测定成纤维细胞的生长代谢,用流式细胞术监测细胞周期分布。采用Real-time PCR扩增的方法分析微波辐照后对细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响。采用抗磷酸化形式的细胞外调节蛋白激酶抗体,通过免疫荧光染色方法和western blot法观察成纤维细胞蛋白质磷酸化情况。结果①成纤维细胞经三种强度(0.5W/cm~2、1.0W/cm~2、5W/cm~2),不同时间(5min、15min、30min)微波辐射,其生长代谢曲线随时间延长而下降。二种不同强度的微波(0.5W/cm~2、1.0W/cm~2)分别辐射5min、15min、30min,其成纤维细胞活性与假辐射组相比变化不大(P＞0.05)。强度5W/cm~2微波辐射5min以上即抑制成纤维细胞的增殖,细胞活性较假辐射组明显降低(P＜0.05)。②强度5W/cm~2的微波辐射5min后,G0/G1期细胞所占比例明显升高(P＜0.05)。③微波辐照对Ⅰ型前胶原基因mRNA表达的抑制作用随时间的延长而增强,在强度为1W/cm~2辐照30min、5W/cm~2辐照5min以上时能显著抑制Ⅰ型前胶原基因mRNA的表达(P＜0.05);而对Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响不大,但是Ⅰ型前胶原基因与Ⅲ型前胶原基因mRNA的比率明显下降(P＜0.05);微波辐射后的成纤维细胞中MMP-9、MMP-13的mRNA表达水平均明显增高。④体外短时间高强度微波辐射能够使~pERK-1/2表达水平明显升高。结论体外短时间高强度微波辐射能降低小鼠成纤维细胞的增殖活性,阻断细胞周期,并使细胞停滞于G0/G1期,并且微波对成纤维细胞的增殖及其胶原产生的某些相关基因的表达具有直接的抑制作用。提示微波在创伤愈合的瘢痕形成阶段起到减少瘢痕形成的作用。此外,微波辐射可激活皮肤成纤维细胞~pERK-1/2信号转导通路,提示MAPK信号转导通路参与了微波辐射对成纤维功能的调节过程。