【摘 要】
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目的:构建CNGA2基因单表达和CNGA2+mBest2基因双表达离子通道细胞模型,观察糖皮质激素干预前、后细胞内Ca2+和Cl-浓度的变化,从分子水平上探讨激素治疗嗅觉障碍的可能机理,为
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目的:构建CNGA2基因单表达和CNGA2+mBest2基因双表达离子通道细胞模型,观察糖皮质激素干预前、后细胞内Ca2+和Cl-浓度的变化,从分子水平上探讨激素治疗嗅觉障碍的可能机理,为临床治疗用药提供理论依据。
方法:应用含有目的基因CNGA2和mBest2的质粒构建pcDNA3.1(+)-CNGA2和pcDNA3.1(+)-mBest2+CNGA2质粒并进行鉴定;将两种质粒稳定转染至HEK293细胞并应用G418筛选,构建HEK293-CNGA2和HEK293-mBest2+CNGA2稳定转染细胞株并进行鉴定;应用糖皮质激素进行干预,激光扫描共聚焦显微镜观察HEK293-CNGA2和HEK293-mBest2+CNGA2细胞内Ca2+和C1-荧光强度的变化。
结果:CNGA2和mBest2单独表达即能形成功能性通道。糖皮质激素干预前,HEK293-pcDNA3.1(+)、HEK293-CNGA2和HEK293-mBest2+CNGA2细胞内Ca2+荧光强度分别为6840.9±1669.3,10046.8±2320.0和7432.1±1891.6,两两比较有显著性差异(p＜0.01);C1-荧光强度分别为9116.5±2015.5,17336.3±2576.4和13475.6±3237.0,两两比较有显著性差异(p＜0.01)。应用糖皮质激素干预后,三种细胞内Ca2+荧光强度分别为5792.4±1539.2,19289.7±4262.0和11857.6±2289.0,两两比较有显著性差异(p＜0.01):C1-荧光强度分别为8808.4±1600.2,16500.6±2669.4和7017.6±1488.3,两两比较有显著性差异(p＜0.01)。比较糖皮质激素干预前、后三种细胞内Ca2+和C1-荧光强度的变化,糖皮质激素能使HEK293-CNGA2和HEK293-mBest2+CNGA2内Ca2+荧光强度增加、C1-荧光强度减弱,差异有统计学意义(p＜0.01),HEK293内Ca2+和C1-、HEK293-CNGA2内C1-荧光强度变化无显著性差异。
结论:CNGA2和mBest2单独表达于HEK293细胞能形成功能性通道;糖皮质激素能够改变表达CNGA2和mBest2的HEK293细胞内Ca2+和Cl-浓度,推测糖皮质激素对嗅感觉神经元离子通道CNGA2和mBest2具有调控作用。
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