贵州道地药材蜘蛛香挥发油的提取工艺及抗肿瘤实验研究

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lyzyk413026
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目的:研究蜘蛛香挥发油的提取工艺及抗肿瘤作用,初步探讨其抗肿瘤机制,为贵州道地药材蜘蛛香的开发利用提供实验依据。方法:(1)采用超临界二氧化碳萃取技术(SFE-CO2)提取蜘蛛香挥发油,并用正交试验优选出最佳提取工艺;采用气相色谱-质谱联用技术分析鉴定其化学成分。(2)经口灌胃急性毒性试验、大鼠阴道给药试验观察其急性毒性及刺激性。(3)MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)的测定检测蜘蛛香挥发油对Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对Hela细胞的凋亡率;Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。(4)建立人宫颈癌Hela细胞裸鼠皮下移植瘤模型,设立蜘蛛香挥发油高、中、低剂量组,阳性对照组(氟尿嘧啶)及模型对照组,于每日皮下注射给药,连续给药15d,给药结束后次日处死裸鼠,记录裸鼠体重、移植瘤体积,计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察各组瘤体组织形态学变化,免疫组化法检测肿瘤组织中低氧诱导因子-1(HIF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)的表达;用CD34标记血管内皮细胞,计数微血管密度(MVD)。结果:(1)SFE-CO2萃取蜘蛛香挥发油的最佳工艺参数为:萃取压力25MPa,萃取温度45℃,萃取时间1.5h,CO2流量为25 L/h,解析温度50℃,解析压力4.2 MPa,提取率为6.52%。蜘蛛香挥发油经GC-TOF/MS分析,检出80个组分,鉴定出67种化合物(占总产物的79.16%),其成分为酸类、缬草素类及萜类等,其中酸类占总产物的37.07%,缬草素类占总产物的16.93%,萜类占3.4%。含量最高的6种成分依次为异戊酸(19.04%),缬草醛(15.13%),Pentanoic acid,oct-4-yl ester(10.4%),亚油酸(7.05%),油酸(5.53%),棕榈酸(3.7%)。(2)蜘蛛香挥发油对小鼠半数致死量(LD50)为21.989g﹒kg-1,95%可信限为16.30429.655g﹒kg-1;大鼠最大耐受量(MTD)为21.72g﹒kg-1;蜘蛛香挥发油对大鼠阴道无急性毒性反应及刺激性。(3)蜘蛛香挥发油对Hela细胞的增殖具有明显抑制作用,其24h和48h的IC50分别为35.48μg﹒mL-1、22.39μg﹒mL-1;随着其给药浓度的升高,Hela细胞的凋亡率上升,Caspase-3和Bax的表达增加,Bcl-2的表达减少。(4)蜘蛛香挥发油高、中、低剂量组对裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为72.33%、58.89%和48.62%,阳性对照组的抑瘤率为65.61%,HE染色显示各给药组瘤体细胞出现不同程度退变和坏死。各给药组与对照组比较,HIF-1、VEGF、VEGFR的表达明显降低,肿瘤组织间质中微血管生成明显减少(P<0.01)。结论:蜘蛛香挥发油具有显著抑制人宫颈癌Hela细胞生长的作用,其可能通过诱导细胞凋亡而发挥体外抗肿瘤的活性;通过下调HIF-1、VEGF、VEGFR的表达,抑制肿瘤血管生成,而达到抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用。
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