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目的:
本实验通过检测血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EMs)患者血清中的表达,初步探讨VEGF在EMs发生发展中的作用及临床意义;检测VEGF启动子区-2578C/A、-1154G/A、-460C/T和+936C/T单核苷酸多态性在本地人群中是否存在,分析Ems患者与健康对照妇女上述基因位点的基因型分布有无差别,旨在进一步探讨VEGF启动子区基因多态性与Ems发病风险的关系;为深入研究其发病机理及针对VEGF的抗Ems治疗奠定理论基础。
方法:本实验采用病例.对照研究的方法,随机选择Ems患者36例,同期选取对照样本36例,以及22例术后经孕三烯酮治疗3个月的Ems患者,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测血清VEGF的表达,比较不同临床症状、不同临床分期及通过手术治疗前后患者血清VEGF表达水平变化的差异:采用蛋白酶K消化一饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA,通过多聚合酶链式反应一限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)的方法,检测VEGF启动子区-2578C/A、-1154G/A、-460C/T和+936C/T基因多态位点的基因型频率分布。
结果:
1、内异症组患者与对照组相比较,年龄差异无统计学意义(P＞0.05),不孕及痛经症状的比较差异有统计学意义(P＜0.05);对照组患者VEGF-2578C/A、-1154G/A、-460C/T和+936C/T多态性位点的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。
2、血清VEGF水平的比较:内异症组患者血清VEGF水平明显高于对照组(P＜0.05);中重组患者血清VEGF水平明显高于轻微组(P＜0.05);内异症组患者有明显的痛经症状时,其血清VEGF水平明显升高(P＜0.05):中重组患者血清VEGF水平明显高于复查组(P＜0.05)。
3、内异症组患者VEGF.2578C/A多态中c等位基因频率为81.9％,明显高于对照组73.6％,两组间等位基因频率分布有明显的统计学差异(P＜0.05);内异症组C/C、C/A、A/A三种基因型频率分别为66.7％、30.6％、2.7％,与正常对照组(55.6％、36.1％、8.3％)相比具有显著差异(P＜0.05);与C/A+A/A基因型相比,C/C基因型能够明显增加内异症的发病风险(OR=1.45,95％CI:1.08～2.00)。
4、内异症组患者-1154G/A多态中G等位基因频率为83.3％,明显高于对照组77.8％,两组间等位基因频率分布有明显的统计学差异(P＜0.05);内异症组G/G、G/A、A,A三种基因型频率分别为69.4％、27.8％、2.8％,与正常对照组(61.1％、33.3％、5.6％)相比具有显著差异(P＜0.05);与G/A+A/A基因型相比,G/G基因型能够明显增加内异症的发病风险(OR=1.41.95％CI:1.03～1.95)。
5、内异症组患者-460C/T多态中T等位基因频率为76.4％,对照组为79.2％,两组间等位基因频率分布无统计学差异(P＞0.05);内异症组T/T、C/T、C/C三种基因型频率分别为58.3％、36.1％、5.6％,与正常对照组(63.9％、30.6％、5.6％)相比无显著差异(P＞0.05);与C/T+C/C基因型相比,T/T基因型并不能够改变内异症的发病风险(OR=0.86.95％CI:0.55～1.06)。
6、内异症组患者+936C/T多态中C等位基因频率为81.9％,对照组为83.3％,两组间等位基因频率分布无统计学差异(P＞0.05);内异症组C/C、C/T、C/C三种基因型频率分别为66.7％、30.6％、2.8％,与正常对照组(69.4％、27.8％、2.8％)相比无显著差异(P＞0.05);与C/T+T/T基因型相比,T/T基因型并不能够改变内异症的发病风险(OR=0.93,95％CI:0.75～1.33)。
结论:
1、血清VEGF表达水平的高低与内异症的临床分期、痛经程度可能有一定的关系,提示血管生成是内异症发生中的一个重要因素,监测血清VEGF浓度有可能成为内异症的无创性辅助诊断指标。
2、血清VEGF水平与疾病的转归可能有一定的关系,动态监测外周血清VEGF的含量变化可作为观察Ems临床治疗效果、评价复发的重要指标,针对VEGF的拮抗治疗极有可能成为在现有药物和手术基础上的一种新的有效治疗策略。
3、VEGF基因启动子区-2578C/A、-1154G/A、-460C/T和+936C/T单核苷酸多态性在本地人群中普遍存在。
4、VEGF基因启动子区-2578C/A和-1154G/A单核苷酸多态性可能与子宫内膜异位症的发病风险明显相关,携带C/C和G/G基因型能够显著增加内异症的发病风险。
5、VEGF基因启动子区-460C/T和+936C/T单核苷酸多态性可能与子宫内膜异位症的发病风险无关。