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目的:应用lactacystin建立帕金森病(PD)细胞模型,模拟人类PD的Lewy小体和细胞凋亡两种病理特征;深入研究lactacystin处理后PC12细胞的蛋白质组的变化,筛选出与PD相关的未知蛋白,为PD病因及发病机制的研究提供新的线索和依据。方法:建立lactacystin诱导的PC12细胞PD模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性及代谢状态,H&E染色观察胞浆内包涵体聚集及其演变过程,免疫组化观察α-synuclein胞内聚集,丫啶澄和溴化乙啶(AO/EB)双染及电镜检测细胞凋亡;提取10μM lactacystin作用24h细胞总蛋白,荧光染料标记和差异双向电泳分离蛋白,DeCyder软件分析差异蛋白质表达信息,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定差异蛋白质。结果:随着lactacystin浓度增大,细胞活力逐渐下降,呈浓度依赖性变化;H&E染色显示胞浆核周出现圆形或椭圆形嗜伊红的包涵体,且α-synuclein免疫组化染色阳性;随着时间延长及浓度加大,包涵体经历从无到有、逐渐增多并游走于细胞外的演变过程;10μM lactacystin作用细胞24h后AO/EB双染提示细胞早期凋亡,电镜显示细胞核变小偏位,部分胞核固缩、趋边、凝聚。提取细胞总蛋白行荧光差异双向电泳,分离出1821±47个蛋白点,DeCyder软件分析出46个蛋白点表达发生显著变化,其中26个蛋白表达上调,20个蛋白表达下调;质谱鉴定出其中6个蛋白,分别是外周蛋白(Peripherin)、酪氨酸羟化酶(TH)、热休克蛋白5(Hspa5)、丝氨酸蛋白酶抑制因子b6(Serpinb6)、醛还原酶(AS)和热休克蛋白8(Hspa8)。结论:成功地建立了lactacystin诱导的PC12细胞的PD模型,证实lactacystin对多巴胺能神经元有毒性作用,并出现胞浆内包涵体和细胞凋亡;通过先进的蛋白质组学技术发现了6个差异蛋白,其中首次在PD相关模型中发现Peripherin和Serpinb6蛋白,研究结果为PD病因及发病机制的研究提供了新的线索和依据。