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目的:探讨用肿瘤细胞抗原致敏树突状细胞(dendritic cells, DC)联合超抗原(superantigen,SAg)葡萄球菌肠毒素A (staphylococcalenterotoxin A,SEA)激活肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte, TIL)体外对小鼠H22肝癌细胞(H22细胞)杀伤活性的作用,以进一步阐明其作用机制,为肝癌的过继免疫治疗寻找新的有效方法。方法:①皮下种植H22细胞建立荷瘤小鼠模型。②用淋巴细胞分离液从荷瘤小鼠瘤体中分离提取TIL并在体外用含10%小牛血清和重组小鼠白细胞介素-2(recombined murine IL-2,rmIL-2)的RPMI1640完全培养基进行培养扩增。③从荷瘤小鼠脾脏中提取小鼠脾淋巴细胞并在体外用含10%小牛血清和rmIL-2的RPMI1640完全培养基进行培养扩增。④从荷瘤小鼠四肢骨中提取骨髓细胞,利用特异性的CD4、CD8a、CD45R单克隆抗体、补体缓冲液和DC的半粘附性,去除粒细胞、T细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞和巨噬细胞,再用小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(murine granulocyte marcophage-colony stimulating factor,GM-CSF)和小鼠白细胞介素-4(murine interleukin-4,IL-4)进行体外培养,以获得大量高纯度DC并进行鉴定。⑤在DC培养过程中加入H22细胞全细胞性抗原以致敏DC。⑥用已致敏DC联合SEA激活TIL。⑦细胞毒性实验,效应细胞分为8组:分别是已致敏DC联合SEA激活TIL组、已致敏DC激活TIL组、SEA激活TIL组、TIL组、已致敏DC联合SEA激活脾淋巴细胞组、已致敏DC激活脾淋巴细胞组、SEA激活脾淋巴细胞组和脾淋巴细胞组;靶细胞为H22细胞和小鼠S180肠癌细胞(S180细胞),效靶比为10:1,用MTT法检测各组效应细胞对两种靶细胞的杀伤活性,并进行比较和统计学分析。结果:(1)TIL获得量为从每克肿瘤组织提取得(3～8)×105个细胞,平均为约6×105个细胞。TIL在体外用IL-2培养扩增,平均第10天达到增