Desmin和TGF-β1在阿霉素损伤足细胞的表达及活性维生素D的干预作用

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目的研究阿霉素(ADM)损伤体外培养足细胞Desmin和TGF-β1表达以及活性维生素D(1,25-dihydroxyvitamin D3, VD)对ADM损伤足细胞的作用。方法用梯度浓度ADM作用体外培养足细胞24h,分别用MTT比色法和Annexin Ⅴ-PI流式凋亡双染术检测足细胞损伤,用RT-PCR技术检测损伤足细胞Desmin和TGF-β1mRNA表达;选择合适的ADM浓度造成体外培养足细胞损伤模型,通过RT-PCR和免疫荧光染色观察VD对这一模型Desmin和TGF-β1表达的影响。结果①ADM对体外培养足细胞有明显损伤作用,MTT实验发现1μmol/LADM作用24h后足细胞细胞活力下降至(82±5)%(P<0.05),随着ADM浓度增加,细胞活力逐渐降低。流式细胞凋亡双染检测提示1μmol/LADM作用24h后足细胞凋亡和坏死显著增加,早期凋亡率为(11±2)%(P<0.05),晚期凋亡和坏死率为(16±3)%(P<0.05)。②RT-PCR实验证实Desmin和TGF-β1mRNA在损伤足细胞表达增加,并和ADM浓度呈相关。和未损伤足细胞相比,1μmol/L ADM作用足细胞24h后Desmin和TGF-β1mRNA表达量增加了约1.5倍(P<0.05)。③以1μmol/L ADM作用足细胞24h作为足细胞损伤模型,VD抑制Desmin和TGF-β1mRNA表达,和模型组比差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光检测发现正常培养足细胞有Desmin和TGF-β1表达,模型组Desmin在细胞核表达明显增多,VD干预组Desmin表达较模型组减少。TGF-β1除在细胞均一表达外,部分呈颗粒状表达,在模型组颗粒状表达在细胞核内明显增多,VD干预组TGF-β1表达较模型组明显减少。结论①ADM损伤足细胞模型可用于体外培养足细胞损伤的实验研究;②VD抑制ADM损伤足细胞Desmin和TGF-β1的表达,可能是其对足细胞保护作用的机制之一。
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