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背景微小RNA (microRNA或miRNA)是一类内源性的、长度约为22个核苷酸的小分子非编码RNA,其可以与mRNA特定位点结合并进一步导致靶基因的降解或翻译的抑制,从而在转录后水平影响肿瘤的发展、复发和转移。现有研究表明miRNA可在肿瘤的侵袭转移过程中扮演着致癌基因或抑癌基因的角色。下咽癌是常见的头颈部恶性肿瘤,尽管包括手术和放化疗在内的综合治疗技术的不断提高,但其多年来总的五年生存率仍在30%—35%左右,是头颈部肿瘤中预后最差的恶性肿瘤之一,治疗失败的主要原因为就诊时已达晚期、局部复发和远处转移。因此,深入研究下咽癌复发转移的具体分子作用机制,探寻转移相关的基因靶点,对于下咽癌的防治具有重要的实际意义。目的1.检测miR-140-5p和ADAM10在下咽癌肿瘤组织和相应的癌旁组织中的表达及miR-140-5p的表达与肿瘤临床病理特征的关系。2.探讨miR-140-5p对下咽癌FaDu细胞迁移和侵袭能力的影响。3.初步分析miR-140-5p影响下咽癌肿瘤细胞迁移和侵袭的分子作用机制。方法1.采用qRT-PCR技术检测40对下咽癌肿瘤组织及癌旁组织中miR-140-5p、 ADAM10 mRNA和Nitch1 mRNA的表达。2.迁移和侵袭实验：利用细胞转染技术上调/下调niR-140-5p的表达,下调ADAM10和Notch1的表达,然后用Transwell迁移和侵袭实验检测FaDu细胞转染后对细胞迁移和侵袭能力的影响。3.双荧光素酶实验：构建ADAM10 3’UTR表达载体,通过双荧光素酶实验验证miR-140-5 p与ADAM10的直接靶向调控关系。4. Western blot实验：利用western blot技术检测下咽癌细胞miR-140-5p过表达/低表达时ADAM10蛋白的表达,干扰ADAM10表达时NICD1蛋白的表达,及miR-140-5p inhibitor与ADAM10 siRNA共转染时NICD1蛋白的表达量。结果1.MiR-140-5p在下咽癌肿瘤组织中显著下调,ADAM10 mRNA在下咽癌肿瘤组织中上调,且miR-140-5 p的表达量与肿瘤T分期与淋巴结N分期相关。2.FaDu细胞转染pre-miR-140-5p后,实验组FaDu细胞的迁移和侵袭能力显著低于对照组。3.FaDu细胞上调miR-140-5p表达后,ADAM10蛋白表达量减少。双荧光素酶实验显示,FaDu细胞共转染pre-miR-140-5p和野生型3’-UTRADAM10时,荧光素酶活性显著降低。4. FaDu细胞下调ADAM10表达后,实验组细胞的迁移和侵袭能力与对照组细胞相比显著降低。5.肿瘤细胞转染anti-miR-140-5p后, NICD1蛋白表达量显著升高,而肿瘤细胞转染si-ADAM10时,NICD1蛋白的表达量显著降低,si-ADAM10能够逆转anti-miR-140-5p对NICD1蛋白的升高作用。在Transwell迁移和侵袭实验中,转染anti-miR-140-5p后,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力升高,转染si-Notchl后,肿瘤细胞的迁移侵袭能力降低,干扰Notchl表达能够逆转anti-miR-140-5p对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的促进影响。结论1. miR-140-5p在下咽癌组织中低表达,ADAM10 mRNA和Notch1 mRNA在下咽癌组织中高表达,且miR-140-5p的表达水平与T分期、N分期相关。2. miR-140-5p明显抑制下咽癌细胞的迁移侵袭能力,其分子作用机制与调控ADAM10/Notch1信号通路有关。3. miR-140-5p在下咽癌侵袭转移中起重要作用,有可能成为下咽癌治疗新的作用靶点。