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目的:复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)被定义为连续发生3次或3次以上自然流产。RSA大多数为早期流产,少数为晚期流产。RSA是妇产科临床常见病,它对孕产妇的身心产生不良的影响,对临床工作者更是一种严峻的挑战,因此对其病因及发病机制的研究有极其重要的意义。细胞凋亡,是母体蜕膜重构、调节滋养层入侵和保持母胎免疫耐受平衡所必须的生理过程。FAS/FASL系统是细胞凋亡最重要的诱导物,激活这个复合体对胚胎植入、滋养层细胞的发育和入侵至关重要,同时也保护滋养层细胞免受母体的免疫攻击系统。改变FAS/FASL基因的表达可能导致细胞凋亡的改变,并最终影响免疫应答和胚胎植入,导致复发性流产的发生。在FAS/FASL基因的启动子区域已确定单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。FAS基因-1377G/A(rs2234767)和-670A/G(rs1800682)与FASL基因-844T/C(rs763110)这三个单核苷酸多态性位点均位于基因启动子区,它们可通过改变基因转录活性而影响蛋白的表达,进而导致细胞凋亡出现异常。国外研究表明了FAS/FASL基因多态性与复发性流产的相关性。然而,据我们所知,这些遗传变异尚未在国内复发性流产女性中进行评估。本研究从遗传学的角度出发,运用聚合酶链反应-多重SNa Pshot SNP分型技术检测RSA患者的这三个基因启动子多态性位点与RSA的相关性,在分子水平上探讨RSA可能的发病机制,为临床工作者提供一定的理论依据。识别与RSA风险相关的基因多态性,很可能成为识别高危孕妇的一个有用工具,以期在临床上对RSA患者开展预防性干预和治疗。方法:1本研究采用病例-对照研究方法,收集99例复发性流产患者和100例对照组女性的静脉抗凝血5ml,采用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-多重SNa Pshot SNP分型技术检测FAS基因位点-1377G/A、-670A/G和FASL基因位点-844T/C 3个多态位点的基因型频率分布。2本研究所有数据分析运用SPSS13.0版软件进行。采用基因计数法计算病例组和对照组的基因型和等位基因频率;计量资料用均数±标准差表示,比较采用t检验;基因型频率的预期值与观察值采用卡方检验进行比较,并进行哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg eguiliberum)法则分析。等位基因、基因型频率在病例组和对照组的分布采用行×列表的χ2检验进行比较。计算相对风险度的优势比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidence interval,CI)。所有数据检测均取双尾值,以P<0.05作为差异具有显著性的标准。结果:1选择的FAS/FASL基因3个SNP基因型分布:对照组FAS基因-1377G/A,-670A/G与FASL基因-844T/C这3个SNP基因型频率的分布均符合哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg eguiliberum)法则(P值均>0.05);2 FAS基因-1377G/A(rs2234767)SNP等位基因和基因型频率比较:FAS基因-1377G/A SNP在复发性流产组及对照组的G和A等位基因频率分别为63.1%、36.9%和74.0%、26.0%,两组相比有显著性差异(P<0.05)。GG、GA、AA这3种基因型的频率分别为37.4%、51.5%、11.1%和51.0%、46.0%、3.0%。FAS-1377G/A的A等位基因的频率复发性流产组(0.37)明显高于对照组(0.26)且差异具有统计学意义(P=0.020,Table 1),A等位基因使复发性流产的发病风险增加(OR=1.66,95%CI=1.08-2.55)。以GG基因型作为参考,AA基因型频率在复发性流产组(11.1%)明显高于对照组(3.0%)且使复发性流产发病风险明显增加(OR=5.05,95%CI=1.32-19.40);3 FAS基因-670A/G(rs1800682)SNP等位基因和基因型频率比较:FAS基因-670A/G SNP A和G等位基因频率在复发性流产组和对照组分别为68.2%、31.8%和66.0%、34.0%,两组相比无显著差异(P>0.05);AA、AG、GG 3种基因型频率分布在RSA(43.4%、49.5%、7.1%)和对照组(43.0%、49.0%、8.0%)间也无显著差异(P>0.05);以AA基因型作参考,AG或GG基因型未明显改变复发性流产的发病风险(OR=0.97,95%CI=0.55-1.69);4 FASL基因-844T/C(rs763110)SNP等位基因和基因型频率比较:FASL基因-844T/C SNP C和T等位基因频率在复发性流产组和对照组分别为72.2%、27.8%和73.5%、26.5%,两组间无显著差异(P>0.05);CC、CT、TT 3种基因型频率分布在复发性流产组与对照组分别为50.5%、43.4%、6.1%和50.0%、47.0%、3.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。以CC基因型作为参考,CT或TT基因型未显著改变复发性流产的发病风险(OR=1.07,95%CI=0.69-1.66);5 FAS/FASL各位点组合基因型比较:为了研究基因型-基因型交互作用,本研究对FAS-1377和FAS-670、FAS-1377和FASL-844、FAS-670和FASL-844基因型的各9个组合共计27个组合进行了评估。其中FAS-670AG/FASL-844CC组合基因型(OR=2.6,95%CI=1.10-61.03)使得复发性流产的发病风险显著增加。FAS-670AA/FASL-844CT组合基因型(OR=2.6,95%CI=1.06-6.26)也具有统计学意义,提示了它在复发性流产发病风险中的角色(Table2、Table3、Table4)。结论:1 FAS-1377G/A单核苷酸多态性与复发性流产发病风险有关,FAS-1377基因位点的A等位基因是复发性流产的重要遗传危险因素,显著增加了复发性流产的发病风险,携带AA基因型显著增加了复发性流产的发病风险。2 FAS-670A/G与FASL-844T/C 2个单核苷酸多态性与复发性流产发病风险无关。3 FAS和FASL基因多态联合基因型FAS-670AG/FASL-844CC使得复发性流产的发病风险显著增高,FAS-670AA/FASL-844CT组合基因型也增加了复发性流产发病风险。