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目的：检测胰腺癌标本及正常胰腺组织中PD-L1（程序性凋亡因子－1）基因的表达差异。筛选靶向人PD-L1基因mRNA的RNAi有效干扰序列，并以此序列构建靶向PD-L1的RNA干扰慢病毒载体，转染人胰腺癌细胞系Patu8988，验证其对PD-L1基因的干扰效率，为进一步研究PD-L1在胰腺癌中的作用及机制提供研究基础。方法：实验共分两部分1.收集22例临床切除的胰腺癌标本，并同时以22例正常胰腺组织标本作对照，应用免疫组化方法(IHC)S-P法检测标本中PD-L1的蛋白表达差异情况。2.根据PD-L1基因序列筛选出三个RNA干扰靶点，并以此序列设计三条shRNA序列，分别构建3个shRNA质粒表达载体，经测序鉴定三个质粒均构建成功。三个质粒分别与过表达PD-L1的质粒载体一起转染293T细胞，Western blotting检测抑制效果，筛选出最有效干扰序列的质粒。以此质粒转染293T细胞，进行病毒包装成LV-PD-L1-siRNA。滴度测定后，转染人胰腺癌细胞系Patu8988，荧光显微镜观察GFP表达，流式细胞仪（FCM）检测转染效率，Real-time PCR、ELISA验证PD-L1在mRNA和蛋白水平表达的变化情况。结果1. PD-L1在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织（χ~2=11.023，P<0.01）。2.构建的质粒表达载体经PCR鉴定均可扩增出预期条带，测序证明质粒构建成功。靶向PD-L1基因的shRNA质粒对293T细胞表达PD-L1有抑制作用，其中以PD-L1-shRNA-3号序列的抑制作用最明显。靶向PD-L1的shRNA片段成功包装入慢病毒载体，病毒滴度为5x10~9TU/ml。慢病毒转染效率达90％以上，其对人胰腺癌Patu8988细胞PD-L1在mRNA水平和蛋白水平表达的抑制效率分别为72.80%和44.66%，可以用于进一步研究实验。结论1.胰腺癌患者肿瘤组织中PD-L1呈过量表达，提示PD-L1在胰腺癌的发生、发展过程中起重要作用。2.筛选出了靶向PD-L1基因的有效RNA干扰序列，并成功构建了靶向PD-L1基因的RNAi慢病毒载体。转染人胰腺癌Patu8988细胞，对PD-L1基因表达具有较高抑制效率，为下一步研究PD-L1在胰腺癌进展中的作用及机制提供了基础。