抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

来源 :中国人民解放军空军军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:peper127
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鼠源性单克隆抗体由于具有免疫原性不能在人体反复应用,而人源性单抗的制备还存在许多困难,如不太稳定,抗体产生水平低等,再者目前所制奋的人源性单抗多为IgM类,不太适合应用。利用基因工程技术可根据人们的需要制备各种类型的新型抗体。 抗体可变区基因的分离是研制基因工程抗体的关键步骤之一,体外扩增(PCR)是获得抗体可变区基因的一种最简便、最迅速的方法。在进行PCR之前,必须首先设计和合成引物,在被扩增序列不完全清楚的情况下,引物的设计工作尤其显得重要。 CD3分子分布于成熟T淋巴细胞表面,它与T细胞抗原受体紧密结合,形成T细胞抗原受体复合物,T细胞受体识别和结合抗原后,刺激信号通过CD3分子传递,CD3抗体可诱导T淋巴细胞活化。最近一些实验结果表明,抗CD3-抗肿瘤的双特异抗体(BIAB)可将细胞毒性T淋巴细胞(CTL)导向肿瘤细胞,从而有效地杀伤肿瘤细胞。用基因工程方法制备的BIAB更有利于在人体应用。 首先,我们比较了人和鼠胚系抗体可变区基因两端的保守性,然
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肾综合征出血热(HFRS)是一种严重的病毒性传染病,在我国流行十分广泛。近年来,对HFRS病毒的病原学,免疫学及分子病毒学进行了广泛的研究,取得重大进展。但HFRS的发病机制,特异性预防和治疗仍未解决。所以研制HFRS特异性疫苗及特异的治疗制剂具有重要的实际意义。鼠抗HFRS病毒的单克隆抗体(McAb)的研究表明:McAb能够有效的保护小鼠免受致死性HFRS病毒的感染,提示McAb有可能成为一种治
HSV糖蛋白是HSV主要的病毒攻击蛋白,与HSV的致病性及诱导机体的免疫应答密切相关。抗HSV糖蛋白抗体具有显著的被动免疫保护作用。本文选用具有动物体内高保护作用的抗HSV-1/HSV-2型共同性gC 1A12-McAb,从其杂交瘤中提取出总RNA,以Oligo(dT)15为引物反转录合威cDNA,用一套鼠抗体通用VL引物和一套设计有PstⅠ和BstEⅡ酶切位点的VH引物进行PCR,扩增出1A12
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人白细胞介素-3(human Interleukin 3,hiL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44bp的DNA片段,序列分析后确定含有完整的hiL-3成熟蛋白编码顺序,并在信号肽与成熟蛋白编码顺序之间突变入了限制性内切酶位点和ATG起始码。构建的PL启动子控制下的hiL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌后经培养、诱导获得hiL-3