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本文从以下几个方面进行论述： 第一部分 CXCL8在mRNA和蛋白质水平上与肺腺癌的发生发展呈正相关 目的:CXCL8作为促炎趋化因子通过自分泌或旁分泌方式对肿瘤细胞的增殖,侵袭和迁移发挥重要功能.然而CXCL8在肺癌中的作用并没有被广泛研究.因此我们重点探究了CXCL8在肺腺癌病人中基因和蛋白质的表达水平,并分析其对肺腺癌发展和预后的影响. 方法:1.利用基因表达芯片数据及荟萃分析方法,初步探究CXCL8在mRNA表达水平上与肺腺癌的相关性.2.运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺腺癌病人的血清及对肺腺癌病人的免疫组织化学芯片(IHC)进行染色,研究在蛋白水平上CXCL8与肺腺癌发生发展的关系. 结果:1.mRNA水平上,肺腺癌组织表达的CXCL8含量明显高于正常组织,且在分化程度差,临床晚期和肿瘤较大的腺癌病人中含量增加更为明显.2.蛋白水平上,外周循环中的CXCL8表达量在分期较晚及分化较差的肺腺癌病人中明显增加.腺癌组织中的CXCL8蛋白含量显著高于相应的癌旁正常组织,且与分期,肿瘤大小,淋巴结转移和病人总生存(OS)时间存在正相关关系. 结论:我们的研究提示,CXCL8水平与肺腺癌的发生发展呈正相关.高表达的CXCL8与肺腺癌的不良预后密切相关且可作为提示腺癌病人总生存的预后因子. 第二部分 DACH1在体内外均明显抑制CXCL8对肺腺癌的促进作用且提示肺腺癌病人的良好预后 目的:课题组之前的研究提示:在乳腺癌中,DACH1可通过抑制CXCL8的转录从而有效地阻止癌细胞的迁移和侵袭.因此我们利用体内外实验来验证在肺腺癌中CXCL8是否为DACH1的潜在靶点以及DACH1能否抑制CXCL8介导的肺腺癌的发生发展. 方法:1.利用公共数据库对DACH1和CXCL8在肺腺癌病人及肺癌细胞系中的表达进行相关性分析,并提取公共数据库的生存数据对DACH1和CXCL8进行独立及融合的K-M生存曲线分析.2.通过细胞因子抗体芯片,细胞系ELISA,Western blot,Real-time PCR和沉默DACH1技术在体外水平双向检测DACH1对于CXCL8表达的调节作用.3.通过Transwell提示DACH1在体外可抑制CXCL8的促进肺腺癌细胞迁移的功能.4.通过向裸鼠皮下注射A549-vector,A549-DACH1和A549-ΔDS细胞建立异种移植瘤模型,在体内水平探索过表达DACH1后肿瘤的生长情况.并利用移植瘤组织的免疫组化染色来评估在DACH1过表达和对照组中,CXCL8,细胞周期蛋白cyclin-D1及增殖相关蛋白Ki-67的表达情况. 结果:1.DACH1和CXCL8两者在肺腺癌细胞及组织中的表达均呈显著负性相关.高表达CXCL8和(或)低表达DACH1的患者总生存时间和无进展生存时间(PFS)均较短.2.体外细胞实验表明DACH1可明显下调CXCL8的mRNA和蛋白表达.3.DACH1主要通过调节CXCL8表达来抑制肺腺癌细胞的迁移功能.4.小鼠体内实验表明DACH1可阻碍肺腺癌移植瘤的生长及增殖,同时下调移植瘤组织中CXCL8,cyclin D1和Ki-67的表达. 结论:DACH1可在体内和体外有效地抑制CXCL8的表达从而阻止肺腺癌细胞的增殖和转移.高表达DACH1和低表达CXCL8有利于肺腺癌病人总生存期与无进展生存期的延长. 第三部分 DACH1通过结合AP-1和NF-kB位点抑制CXCL8的转录 目的:探索DACH1抑制CXCL8表达的分子机制以及DACH1阻断炎症刺激因子(TPA和TNF-α)对CXCL8的激活作用. 方法:1.293T细胞中转入不同的含DACH1表达突变体质粒及CXCL8启动子位点突变体质粒,利用荧光素酶报告基因检测CXCL8启动子活性从而确定DACH1的功能结构域,DACH1作用于CXCL8启动子的具体位点及TPA和肿瘤坏死因子α(TNF-α)影响下CXCL8启动子的活性变化.2.通过Real-time PCR检测在DACH1,TPA和TNF-α影响下CXCL8mRNA含量的变化. 结果:1.过表达DACH1能够明显抑制CXCL8启动子活性,然而DS结构域的缺失可削弱DACH1的这种抑制作用.当CXCL8启动子区域AP-1和NF-kB位点突变时,CXCL8启动子活性降低且DACH1对CXCL8的抑制作用也相应减弱.2.TPA和TNF-α作为CXCL8的刺激因子可有效地增加肺腺癌细胞CXCL8的mRNA含量.DACH1可显著抑制TPA和TNF-α诱导的CXCL8的mRNA表达. 结论:我们的研究提示DACH1依赖于自身的DS结构域,通过与CXCL8启动子区域的AP-1和NF-kB位点结合从而抑制基础状态和诱导状态下的CXCL8启动子转录活性进而减少mRNA的表达.