目的　　 代培养RA(rheumatoid arthritis;类风湿关节炎)滑膜细胞,获取高纯度滑膜成纤维细胞,转特异性的siRNA染入RA滑膜成纤维细胞内,给予炎性刺激因素干预,探讨是否能降低RA滑膜成纤维细胞Aggrecanase-1表达水平,及siRNA技术在RA基因治疗中的可行性。　　 方法　　 收集类风湿性关节炎病人膝关节置换术中病变的类风湿性滑膜组织,采用酶消化法进行体外滑膜细胞的分离培养并传至3-5代,倒置显微镜下观察细胞生长状态,通过免疫组化鉴定。定制siRNA转染试剂及转染诱导剂,制备可靠的特异性siRNA,将RA滑膜成纤维细胞分为四组,分别为转染TAK1-siRNA细胞组(实验组),错配碱基阴性转染对照细胞组、GAPDH-siRNA阳性对照组和未转染细胞组(对照组)。转染后对各组进行IL-1β干预,收集各组细胞上清液,ELISA方法比较各组Aggrecanase-1(聚蛋白多糖酶-1)的释放量。　　 结果　　 该实验4例患者的滑膜细胞标本均采用体外消化培养法成功培养,平均传代至3～5代,细胞生长状态较好,比较稳定,大约传至第7代时细胞生长减慢,出现老化状态。免疫组化鉴定滑膜细胞均一地表达Vimetin(＞95%)、表明所培养的细胞是滑膜成纤维细胞。检测炎性刺激后实验组与对照组相比Aggrecanase-1含量有明显的差异,呈现出组间差异,表明通过抑制TAK1可降低Aggrecanase-1表达水平,以降低对关节软骨的损伤。　　 结论　　 Tak1siRNA能有效下调RA滑膜细胞Aggrecanase-1表达,为基因治疗类风湿性关节炎奠定实验基础。