目的：建立大鼠气虚、血瘀、肾亏和气虚血瘀肾亏型颈椎病病证结合模型,研究益气化瘀补肾方对不同证型颈椎病的作用机理。 方法： 1.采用3月龄雌性SPF级大鼠60只,分为6组,每组10只。40只大鼠采用切断颈部肌肉、棘上和棘间韧带的方法建立动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型。在此基础上,复合3个证候模型。分别为：采用去卵巢法建立肾亏模型(与颈椎病同时造模),疲劳加饥饱失常法建立气虚模型(颈椎病造模后2.5个月建模),肾上腺皮质激素和肾上腺素应用法建立血瘀模型(颈椎病造模后2.5个月建模)。颈椎病造模3个月后,动物取材,通过动物行为、体征的观察、放射免疫、流式细胞术、血生化、组织病理学、免疫组织化学、Real-time PCR等方法和技术,观察和测定相关证候指标及颈椎间盘组织形态、细胞外基质中蛋白多糖、相关胶原和降解酶的变化,建立病证结合动物模型。 2.采用3月龄雌性SPF级大鼠110只,分为11组,每组10只。同上述方法造模。颈椎病造模3个月后,单纯颈椎病模型与各病证结合模型的治疗组予益气化瘀补肾方灌胃治疗一个月后,所有动物取材。检测方法同上,研究益气化瘀补肾方对不同证型颈椎病的作用机理。 结果： 1.气虚、血瘀、肾亏型颈椎病动物模型的建立。 (1)动物行为、体征观察：与正常对照组比较,颈椎病组无明显异常；气虚型颈椎病模型组出现明显倦怠、乏力等气虚表现；血瘀型颈椎病模型组出现舌质瘀紫或瘀斑,尾色瘀青；肾亏型颈椎病模型组动物形体肥胖,不甚喜动,无明显气虚、血瘀表现；气虚血瘀肾亏型颈椎病模型组上述异常表现均可见。 (2)体重变化：与正常组比较,颈椎病模型组体重无明显变化；气虚型颈椎病模型组造气虚模型后体重下降明显；血瘀型颈椎病模型组造血瘀模型第9天后体重略上升；肾亏型颈椎病模型组体重一直上升,幅度最大；气虚血瘀肾亏型颈椎病模型组体重变化开始与肾亏型颈椎病一致,造气虚模型后与气虚型颈椎病一致。 (3)子宫、附件形态及重量：肾亏型颈椎病模型组子宫体积变小,输卵管管径变细；气虚、肾亏、气虚血瘀肾亏型颈椎病模型组子宫、附件重量下降明显。 (4)各模型组cAMP、cGMP及其比值有不同程度的改变；血瘀、肾亏、气虚血瘀肾亏型颈椎病模型组甘油三酯明显下降,气虚、肾亏型颈椎病模型组胆固醇分别降低、升高显著；气虚型颈椎病模型组LDH显著升高；血液流变学指标,血瘀型颈椎病模型组明显升高,气虚、气虚血瘀肾亏型颈椎病模型组个别指标升高；病证结合模型组CD62p均有不同程度升高；血瘀、肾亏、气虚血瘀肾亏型颈椎病模型组雌二醇明显降低。 (5)软骨细胞线粒体超微结构观察：各模型组线粒体结构有不同程度破坏,病证结合模型组破坏更加严重。 (6)颈椎间盘形态学观察：各模型组颈椎间盘均有不同程度退变,病证结合模型组退变严重。 (7)免疫组织化学：病证结合模型组II型胶原蛋白与正常对照组和颈椎病模型组相比表达减少,X型胶原表达增高。 (8)分子生物学：各模型组椎问盘Aggrecan、Col2 α1基因表达明显降低；MMP-13活性增高、TIMP-1抑制作用降低。 2.益气化瘀补肾方作用机理研究。 (1)动物的行为、体征观察：造模结束后,动物精神状态、皮毛、舌质、尾色逐渐恢复,大概一周后与正常对照组无明显差异,治疗组恢复稍快。 (2)子宫及附件重量：病证结合组子宫及附件重量下降,肾亏和气虚血瘀肾亏型颈椎病组重量最小,气虚型颈椎病治疗组与模型组相比重量增加,有统计学意义(P<0.05)。 (3)各模型组cAMP、cGMP及其比值有不同程度的改变,益气化瘀补肾方对cAMP、cGMP具有调节作用：各模型组甘油三酯、胆固醇有不同程度改变,益气化瘀补肾方能调节血脂；气虚、血瘀型颈椎病模型组LDH显著升高(均为P<0.05),治疗组降低；各模型组存在不同程度的血液流变学指标增高,治疗组血液流变学指标降低；各模型组CD62p的表达均明显增高,病证结合治疗组CD62p下降明显,有统计学意义；模型组雌二醇有不同程度降低,病证结合模型组降低明显,肾亏和气虚血瘀肾亏型颈椎病治疗组雌二醇明显增高(均为P<0.05)。 (4)颈椎间盘形态学观察：与正常对照组相比,各模型组颈椎间盘均有不同程度退变,病证结合模型组退变严重,治疗组退变减轻。 (5)免疫组织化学：模型组II型胶原蛋白表达减少,与模型组比较治疗组II型胶原表达增多。 (6)分子生物学：各模型组椎间盘Aggrecan、col2 α1基因表达明显降低,MMP-13表达增高、TIMP-1表达降低；与模型组比较,治疗组Aggrecan、Col2 α1、TIMP-1表达明显增多,MMP-13表达减少。 结论： 1.通过病、证模型复合的方式,建立了气虚、血瘀、肾亏及气虚血瘀肾亏型颈椎病动物模型。 2.气虚、血瘀、肾亏可以加重颈椎间盘的退变,通过免疫、代谢系统、凝血系统、内分泌系统起作用。 3.气虚、血瘀、肾亏之间相互影响,在颈椎病中、后期出现明显肾亏证,因此治疗颈椎病时要益气、化瘀、补肾兼顾。 4.益气化瘀补肾方通过调节机体免疫、代谢,降低血凝,调节内分泌,改善了气虚、血瘀、肾亏证候指标并延缓了椎间盘退变。 5.益气化瘀补肾方对肾亏型和气虚血瘀肾亏型颈椎病作用效果较好,为临床治疗颈椎病提供了参考。 6.提示我们要重视中医“治未病”思想,积极预防、及早治疗。 7.为中医“病-证-效”相结合的基础研究提供了平台。