目的：建立一种简便、灵敏和特异的检测尿液Ki-67mRNA和UCA1mRNA的实时荧光定量PCR方法，探讨其对膀胱癌诊断的应用价值。　　 方法：构建包含Ki-67和UCA1基因目的片段的重组质粒，以此为模板标准品，在荧光TaqMan的基础上建立检测Ki-67mRNA和UCA1mRNA的实时PCR方法，并进行方法学评价（包括线性范围、灵敏度、特异性、重复性）。以20例健康志愿者和25例非膀胱癌的泌尿系疾病患者作为对照组，用实时PCR方法检测45例对照组和48例膀胱癌组患者尿液Ki-67mRNA和UCA1mRNA的表达。　　 结果：成功构建重组质粒pGEM-T-Ki-67和pGEM-T-UCA1，建立的实时PCR方法线性范围较宽(102～108copies/μL)，重复性好（Ki-67和UCA1批内变异系数为0.31％和1.23％；批间变异系数为1.16％和1.48％，均小于3％）。Ki-67和UCA1分别以Ct值为31.6和32.5为诊断阈值，两者联合诊断的灵敏度和特异度分别为91.6％和86.6％，优于单一标志物的检测（P＜0.05）。膀胱癌组Ki-67mRNA和UAC1mRNA高于非膀胱癌疾病组(P＜o.05）和健康组（P＜0.05），差异有统计学意义。膀胱癌组按病理分期分Tis/Ta、T1-2、T3-4三组，Ki-67mRNA和UAC1mRNA在Tis/Ta组低于T1-2组(P＜0.05）、T1-2组低于T3-4组（P＜0.05），差异有统计学意义。　　 结论：建立的TaqMan实时PCR方法简单、灵敏、特异、结果数据化，适合临床实验室用于尿Ki-67mRNA和UCA1mRNA的定量检测，有望用于膀胱癌的诊断、预后及复发监测，并有助于鉴别疾病分期。