目的：从胆固醇、靶向线粒体抗氧化剂MitoQ冷冻保存前导入和解冻复苏后导入甲状腺素这两方面组合来研究，是否多种途径共同作用对鱼类冷冻冻精子质量有更好的挽救效应。　　方法：DCFH-DA/PI双染色法结合流式细胞术检测精子细胞内ROS水平；JC-1法结合流式细胞术检测线粒体膜电位（MMP）；ATP检测试剂盒结合多功能酶标仪检测ATP水平；TBA比色法结合多功能酶标仪检测脂质过氧化产物丙二醛（MDA）；Western blot方法检测蛋白的表达。　　结果：T3的添加方式是在精子解冻后直接加入到精子悬液中并在37℃环境中孵育，T3对黄颡鱼冻精的作用浓度和孵育时间是7nM120 min时对黄颡鱼解冻后精子的活力有明显改善P＜0.05。对斑马鱼作用的浓度和时间是10 nM30 min时对斑马鱼解冻后精子的活力有改善作用。通过试剂盒检测 T3对黄颡鱼和斑马鱼冻精生化参数的影响：经过 T3处理过的冻精ATP的含量都有明显的升高（P＜0.05）,另外处理组MDA，ROS含量下降，MMP水平上升的变化也都相一致。T3对鱼类冻精的UCP2蛋白的表达并没有明显的变化（p≥0.05）。结果显示 T3对黄颡鱼和斑马鱼冻精的精子质量有一定的改善作用。因此进一步研究多重药物组合对鱼类冻精精子质量的影响。CLC和 MitoQ的添加方式是在精子冷冻前将这两种物质添加到精子悬液之后在室温下孵育15 min后再进行冷冻。CLC和MitoQ对黄颡鱼斑马鱼精子冷冻损伤具有明显的改善作用已经得到证实。因此将T3，CLC和MitoQ组合方式共CON，T3，CLC，MitoQ，CLC+ T3，MitoQ+ T3，CLC+ MitoQ和 CLC+MitoQ+T38个组别。T3，CLC，MitoQ单独作用时对黄颡鱼冻精的活力都有明显的改善作用（p＜0.05），但是两种或三种联合作用与单独作用并没有明显的差别（p≥0.05）。单独作用对黄颡鱼冻精 MDA的产生都有明显的下调的作用，联合作用时同样没有明显的差别。另外，单独作用及联合作用对黄颡鱼冻精 ATP，ROS的产生和MMP都没有明显的作用。在黄颡鱼的实验结果中显示，T3实验组 UCP2表达水平与其他实验组相比较有明显的升高，其他实验组之间 UCP2的表达水平并没有明显的差别。在斑马鱼结果显示所有实验组间均没有显著性的差别（ p≥0.05）， T3+ CLC+MitoQ实验组相较于其他组UCP2的表达量有所下降。在黄颡鱼实验结果中显示 CLC+ MitoQ及与 T3的组合作用对 Na+/K--ATPase的表达量与其他组相比较有明显的升高（p＜0.05）。而在斑马鱼结果中T3及MitoQ+T3实验组Na+/K--ATPase的表达量较其他组有所升高。黄颡鱼是结果显示CLC+MitoQ+T3实验组ATP citrate lyase的表达水平与其他实验组相比较有明显的升高（ p＜0.05）， CLC+ MitoQ实验组中Hexokinase的表达水平与MitoQ及MitoQ+T3实验组相比较有明显的升高。斑马鱼冻精实验结果中所有处理组中ATP citrate lyase的表达水平均比较稳定， CLC实验组中 Hexokinase的表达量较其他实验组有所上调，其他实验组间无明显的差别（p≥0.05）。黄颡鱼实验结果中CLC+ T3，CLC+ MitoQ实验组PARP的表达水平较其他组相比有所升高，在斑马鱼实验中 PARP的表达水平均没有明显的差别（p≥0.05）。黄颡鱼结果中 GLUT1的表达水平均没有明显的差异，在斑马鱼中CLC+ MitoQ及CLC+ MitoQ+ T3实验组GLUT1表达水平较其他组相比较有所升高，其他组见均没有明显差异（p≥0.05）。　　结论：T3，CLC，MitoQ对黄颡鱼和斑马鱼冻精的精子质量有一定的改善作用。任何两种药物联合作用后对精子质量的改善作用与单独作用时并没有明显差别。三种物质联合作用与其他实验组相比较同样没有明显差别。T3对鱼类冻精 UCP2的表达与其他实验组相比较有轻微的上调作用。T3，CLC，MitoQ组合作用对黄颡鱼和斑马鱼冻精的部分代谢蛋白有一定的影响，但是这些蛋白的变化对鱼类冻精精子质量的影响比较轻微。针对斑马鱼和黄颡鱼的两种实验结果并不完全相一致，这可能还是由于物种之间的差异和冷冻时所使用的技术手段的不同所造成的。