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【摘要】目的建立FQ-PCR(real-time Fluorescent Quantitative PCR)系统,定量检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)患者血清中游离的EBV(Epstein Barr Virus,EBV)-DNA,探索EBV-DNA用于NPC的诊断、预后判断及疗效判断的价值。方法收集101例鼻咽癌患者和49例正常对照者血清作为检测标本。101例患者中Ⅰ期3例,Ⅱ期11例,Ⅲ期39例,Ⅳ期48例。根据鼻咽癌患者血清中游离的EBV-DNA基因全序列设计引物和探针, PCR扩增EBV-DNA BamHI- W基因片段,并将其克隆到pGEM-T Easy载体上,构建质粒标准品;建立FQ-PCR体系。用已建立的荧光定量PCR方法对EBV-DNA含量进行定量检测所有标本。同时采用酶联免疫吸附法测定血清EBV衣壳抗原的IgA抗体(IgA/VCA)。结果1、NPC患者治疗前血清EBV-DNA平均浓度为58400 copies/ ml和阳性检出率为90.6%(91/101) ,患者治疗后血清EBV-DNA平均浓度为(1243.36copies/ml,18.75 % 8/44)和正常人血清EBV-DNA水平平均浓度为0 copies/ml和检出率分别为0% (0/49)。NPC患者治疗前血清EBV-DNA水平显著高于治疗后和正常人(P均<0.01)。NPC患者治疗前血清EBV-DNA阳性检出率显著高于治疗后和正常人(P均小于0.05)。NPC患者治疗后血清EBV-DNA水平和检出率与正常人比较,差异均无显著意义(Mann-Whitney U检验, P=0.256;卡方检验,P=0.223)。血清VCA/IgA抗体阳性率为83.1%(84/101)明显高于正常对照组(4.1%, 2/49)。鼻咽癌患者EBV-DNA水平阳性率90.6%,同时血清VCA- IgA的阳性率为83.1%,DNA检测灵敏度略高于VCA/IgA检测。2、Ⅲ—Ⅳ期鼻咽癌患者的血清EBV-DNA阳性率(89.7%, 35/39;89.6%,43/48)较Ⅰ-Ⅱ(72.7%8/11)期患者为高,有显著性差异(P <0.01)。NPC患者治疗前血清EBV-DNA水平随临床TNM分期越晚而显著增高。Ⅰ期为3390±1540copies/ml,Ⅱ期为11802±5603copies/ml,Ⅲ期为56488±27234 copies/ml, IV期为722275±321351 copies/ml, Kruskal-Wallis H检验分析结果显示各临床分期间的鼻咽癌患者血清中游离EBV-DNA的平均拷贝数均有显著性差异(P<0.005)。3、鼻咽癌患者治疗前血清VCA/IgA S/CO平均值为3.8158(S/CO>1为阳性,<1为阴性),略高于治疗后平均值3.1261( P>0.05)差别无显著意义。但明显高于正常对照组0.7318( P<0.05),差别有显著意义。NPC患者治疗前血清EBV-DNA水平平均值为58 400拷贝/ ml显著高于治疗后(平均值为1243.36拷贝/ ml ) (P<0.05)和正常人(中位值0拷贝/ ml) ( P<0.01)。结论1.成功建立了鼻咽癌患者血清中EB病毒DNA的FQ-PCR定量检测体系。该体系检测FQ-PCR定量检测体系结果稳定、准确,灵敏度高,重复性和特异性好。2.血清EB病毒游离DNA可用于监测鼻咽癌患者的治疗效果,其价值明显优于VCA/IgA。3.荧光定量PCR法检测血清EB病毒游离DNA可作为鼻咽癌的诊断、临床分期、肿瘤负荷的方法之一。