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目的: 本实验旨在比较研究AA患者骨髓血管niche( Vasc ular nic he)、血管旁nic he(Perivascular niche)及成骨niche(Osteoblastic niche)与对照组有无差异,并对allo-HSCT后AA患者骨髓 niche是否有改变进行观察,并初步探讨移植后AA患者骨髓niche改变的原因,为研究AA骨髓niche提供实验基础,亦为探讨AA的发病机制提供研究基础。 方法: 取46例初诊AA患者和15例对照组骨髓活检标本,进行抗CD34、CD146和Osteopontin免疫组化染色,分别计数CD34+血管内皮细胞、CD146+血管旁细胞和Osteopontin+骨内膜下细胞,比较 AA患者骨髓 niche与对照组骨髓 niche靶细胞数有无差异。其中 CD34+血管内皮细胞、CD146+血管旁细胞、Osteopontin+骨内膜下细胞分别代表血管niche、血管旁niche、成骨niche。24例AA患者接受allo-HSCT,分别在移植后+1m、+2m、+3m、+6m和+12m取骨髓标本,通过免疫组化染色检测骨髓niche靶细胞数较移植前是否有改变;用骨髓MSCs培养、STR-PCR和ELISA方法,检测骨髓MSCs DNA指纹图、骨髓细胞因子水平,推测引起AA患者a llo-HSC T后骨髓nic he改变的可能原因。 结果: 1.46例初诊AA患者骨髓niche与对照组相比,每个高倍视野CD34+血管内皮细胞(8.00 vs12.67)、CD146+血管旁细胞(7.17 vs10.67)及Osteopontin+骨内膜下细胞(0.33 vs3.67)均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。 2.24例移植的 AA患者 C D34+血管内皮细胞、C D146+血管旁细胞及Osteopontin+骨内膜下细胞数分别为7.30±3.51、6.68±3.59、0.90±1.85,均明显低于对照组12.22±3.85、12.53±5.43、4.95±4.58,差异有统计学意义(P<0.05)。移植后第1月 CD34+血管内皮细胞和 CD146+血管旁细胞数分别为12.75±3.94、10.84±4.65,与移植前差异有统计学意(P<0.05),而与对照组无统计学差异(P>0.05),即骨髓血管nic he和血管旁nic he细胞数有修复;Osteopontin+骨内膜下细胞1.69±1.56,较移植前有增高,但与移植前差异无统计学意义(P>0.05),即成骨niche无修复。在allo-HSCT后第2月,CD34+血管内皮细胞和CD146+血管旁细胞数达高峰,分别为15.67±6.81、14.55±7.19,与移植前差异有统计学意义(P<0.05),与对照组差异无统计学意义(P>0.05);Osteopontin+骨内膜下细胞数1.79±2.66,但与移植前差异无统计学意义(P>0.05)。第3、6、12月,骨髓CD34+血管内皮细胞和CD146+血管旁细胞数均较移植前升高,其中CD34+血管内皮细胞和CD146+血管旁细胞数与移植前差异仍然有统计学意义(P<0.05),但 Osteopontin+骨内膜下细胞与移植前差异均无统计学意义(P>0.05)。 3.共分析21例次allo-HSCT后AA患者骨髓MSCs DNA指纹图,供者源骨髓MSCs嵌合率1.93%±1.19%,且均小于5%。 4.与移植前相比,正性调控细胞因子VEGF、SDF-1α移植后升高,其中VEGF升高有统计学意义;负性调控因子OPN、TNF-α、IFN-γ移植前后没有明显改变。 结论: 1.与对照组相比,AA患者骨髓血管nic he、血管旁niche及成骨niche细胞数均明显减少。 2.与移植前比较,AA患者a llo-HSC T后1年内,血管nic he和血管旁niche细胞数增加,在移植后第2月达高峰,而成骨niche细胞数未见明显改变。 3. AA患者allo-HSCT后1年内,无供者源骨髓MSCs植入;负性调控因子OPN、TNF-α和 IFN-γ移植前后没有明显改变,而正性调控因子 VEGF和SDF-1α较移植前升高可能是血管niche和血管旁niche修复的原因。