【摘 要】
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目的膀胱癌是泌尿系统发病率最高的肿瘤,术后复发是其主要的特征.膀胱灌注BCG免疫治疗是预防膀胱癌复发的最好方法,但是灌注BCG有发热、血尿、脓尿和脓毒血症的并发症,一些患
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目的膀胱癌是泌尿系统发病率最高的肿瘤,术后复发是其主要的特征.膀胱灌注BCG免疫治疗是预防膀胱癌复发的最好方法,但是灌注BCG有发热、血尿、脓尿和脓毒血症的并发症,一些患者因此被迫停止治疗致使肿瘤复发.寻找新的治疗和预防膀胱癌的疫苗和药物是临床急需解决的课题.BCG细胞壁的成分和BCG的抗原也具有抗肿瘤的能力,DNA疫苗的出现为制备新的疫苗提供方法.因此该研究利用基因工程技术构建结核分枝杆菌Ag85A的DNA疫苗,并研究其灌注膀胱后减轻膀胱炎和预防膀胱癌的作用.方法培养结核杆菌H37Rv,提取DNA,根据DNA序列设计并合成Ag85A的引物,采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因组中,扩增出分泌蛋白Ag85A成熟蛋白的编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体pGEM-T Easy中.经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3.1的相应酶切位点.用电穿孔的方法将pcDNA3.1/Ag85A转入培养的CHO细胞,提取mRNA采用RT-PCR检测Ag85A的表达.重组质粒肌注免疫小鼠3次,用ELISA法检测抗体滴度.用已经构建好的pcDNA3.1/Ag85A DNA疫苗进行动物实验.将BCG和pcDNA3.1/Ag85A与阴性对照生理盐水和质粒pcDNA3.1灌注大鼠膀胱,灌注5次后取大鼠膀胱进行镜下检查,比较膀胱局部白细胞浸润的程度.在灌注上述药物后用MNU诱发大鼠膀胱癌,5周后检测并比较膀胱肿瘤的发生率.
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